術(shù)語和定義

可比性：使用不同的測量程序測定某種分析物獲得的檢測結(jié)果間的一致性。結(jié)果間的差異不超過規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)時，為結(jié)果具有可比性^［4］。

臨界差值（critical difference，CD）：當(dāng)試劑批次變更時，同一標(biāo)本使用在用和待用批次試劑測定所得的結(jié)果之間的最大可接受差異（不影響臨床診療決策），稱為臨界差值，即醫(yī)學(xué)允許誤差，以標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）或變異系數(shù)（CV）表示^［3］。

拒絕限：在選定的統(tǒng)計功效下，判斷批次間比對的平均偏差的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以臨界差值的倍數(shù)表示^［3］。

測量精密度：在規(guī)定條件下，對同一或類似被測對象重復(fù)測量所得示值或測得值間的一致程度，也稱為精密度。以不精密程度表示，如在規(guī)定測量條件下的標(biāo)準(zhǔn)偏差或變異系數(shù)等^［5］。測量精密度包含測量重復(fù)性（S_r）和試劑批內(nèi)精密度（S_WRL）。

測量重復(fù)性：簡稱重復(fù)性，指在相同地點，由相同操作者在相同測量系統(tǒng)、相同操作條件下，采用相同測量程序、在短時間內(nèi)對同一或類似被測對象進行重復(fù)測量，得到的測量精密度，用S_r表示^［5］。

試劑批次內(nèi)精密度：指在相同地點，使用相同測量系統(tǒng)、相同批次試劑條件下，采用相同測量程序、在一個較長時間內(nèi)對同一或類似被測對象進行重復(fù)測量，得到的測量精密度，屬于期間精密度的一種，用S_WRL表示^［3］。

測量區(qū)間：在規(guī)定條件下，由具有不確定度的檢測儀器或檢測系統(tǒng)測定出的一組同類量的量值^［5］。

校準(zhǔn)驗證：采用與臨床標(biāo)本相同的檢測儀器測定校準(zhǔn)驗證物質(zhì)或已知濃度的標(biāo)本，以證實該儀器的校準(zhǔn)是否在可接受范圍內(nèi)，如在可接受范圍內(nèi)則視為驗證通過。

試劑批次變更驗證的總則

試劑批次變更包括試劑批號變更和試劑貨運號變更。試劑批號變更是指實驗室接收了與上一批是相同生產(chǎn)廠家、相同檢測原理、不同生產(chǎn)批號的新試劑。試劑貨運號變更是指實驗室接收了與上一批是相同批號、不同貨運號的新試劑。實驗室應(yīng)在新批次試劑使用前完成驗證工作。試劑批次變更驗證的流程見圖1。

圖1 試劑批次變更驗證程序流程圖

一、試劑批號變更的驗證內(nèi)容

試劑批號變更時，使用校準(zhǔn)曲線的項目如FIB、DD和FDP，應(yīng)進行待用批號試劑的項目校準(zhǔn)（預(yù)定標(biāo)除外），并進行校準(zhǔn)驗證。INR應(yīng)視制造商要求進行項目校準(zhǔn)或賦值，并進行驗證。常用血栓與止血項目均應(yīng)進行臨床標(biāo)本比對試驗；臨床標(biāo)本比對試驗通過后，應(yīng)進行質(zhì)控物檢測；PT、APTT和TT應(yīng)進行參考區(qū)間驗證。驗證內(nèi)容見表1。

同一實驗室使用多臺相同檢測儀器時，若待用試劑的批號及貨運號均相同，應(yīng)至少在一個檢測地點的一臺儀器上執(zhí)行試劑批號變更驗證程序，對于其他檢測儀器，應(yīng)通過質(zhì)控物檢測進行結(jié)果一致性確認，校準(zhǔn)或賦值驗證后的項目如INR、FIB、DD、FDP宜采用待用批號試劑進行儀器間比對試驗。

二、試劑貨運號變更的驗證內(nèi)容

若待用與在用貨運號試劑運抵實驗室的時間間隔≤6個月，可使用質(zhì)控物檢測的方式確認待用貨運號試劑是否可接受，質(zhì)控物檢測未通過時則需進行臨床標(biāo)本比對試驗；若兩個貨運號試劑運抵實驗室的時間間隔>6個月，應(yīng)執(zhí)行試劑批號變更驗證程序。

三、用于試劑批次變更驗證的臨床標(biāo)本的總體要求

1.用于試劑批次變更驗證的臨床標(biāo)本首選3.2%枸櫞酸鈉抗凝的新鮮靜脈血標(biāo)本，標(biāo)本的采集及處理參照《血漿凝固實驗血液標(biāo)本的采集及處理指南》進行^［6］。

2.標(biāo)本應(yīng)無乳糜、黃疸及溶血等現(xiàn)象，血細胞比容應(yīng)在20%~55%范圍內(nèi)。

3.標(biāo)本體積應(yīng)同時滿足在用和待用試劑的驗證需求，若單個標(biāo)本的血漿體積達不到驗證所需，可采用兩個或兩個以上標(biāo)本的血漿均勻混合后作為驗證標(biāo)本，混合標(biāo)本的檢測結(jié)果應(yīng)加以標(biāo)識，數(shù)量不超過標(biāo)本總數(shù)的20%。

四、項目校準(zhǔn)及驗證

FIB、DD和FDP試劑批次變更時，實驗室應(yīng)按照儀器及試劑制造商要求完成項目校準(zhǔn)或預(yù)定標(biāo)，并進行校準(zhǔn)驗證。校準(zhǔn)驗證不通過時，需分析原因并糾正，再執(zhí)行校準(zhǔn)及校準(zhǔn)驗證程序。

（一）校準(zhǔn)驗證物質(zhì)的選擇

1.參考物質(zhì)或其他定值物質(zhì)，包括但不限于：（1）已賦值的一級、二級標(biāo)準(zhǔn)品或參考物質(zhì)；（2）室間質(zhì)評物；（3）試劑制造商提供的用于校準(zhǔn)驗證的物質(zhì)或另一批號校準(zhǔn)品；（4）試劑使用說明書推薦的適用于校準(zhǔn)驗證的第三方互換性參考物質(zhì)。

2.臨床標(biāo)本：商品化校準(zhǔn)驗證物質(zhì)無法獲得時，推薦使用臨床標(biāo)本進行校準(zhǔn)驗證。

（二）使用校準(zhǔn)驗證物質(zhì)的校準(zhǔn)驗證方案

1.至少使用5份商品化校準(zhǔn)驗證物質(zhì)，含2個或以上水平，濃度應(yīng)覆蓋線性范圍，并包含醫(yī)學(xué)決定水平。

2.按照校準(zhǔn)驗證物質(zhì)的使用說明書操作，使用待用批次試劑進行單次檢測。

3.計算每份標(biāo)本檢測結(jié)果與靶值（公議值或所賦參考值）的相對偏差。

（三）使用臨床標(biāo)本的校準(zhǔn)驗證方案

1.選擇在用試劑已測定的標(biāo)本至少5例，標(biāo)本水平應(yīng)覆蓋線性范圍，包括醫(yī)學(xué)決定水平。

2.在4 h內(nèi)完成在用批號和待用批號試劑對標(biāo)本的單次檢測。

3.計算待用和在用批號間標(biāo)本檢測結(jié)果的相對偏差：

相對偏差（% b_i）=（待用批次結(jié)果-在用批次結(jié)果_i）×100/在用批次結(jié)果_i

（四）結(jié)果判讀

1.校準(zhǔn)驗證以總誤差作為評價指標(biāo)，用相對偏差表示。實驗室可自行制定校準(zhǔn)驗證標(biāo)準(zhǔn)，至少應(yīng)滿足表2要求。

2.結(jié)果判讀：≥80%標(biāo)本測量結(jié)果的相對偏差應(yīng)滿足校準(zhǔn)驗證標(biāo)準(zhǔn)要求（表2）。

建議1 FIB、DD和FDP試劑批號變更時，實驗室應(yīng)按照儀器及試劑制造商要求完成項目校準(zhǔn)或預(yù)定標(biāo)，并進行校準(zhǔn)驗證。

建議2 推薦使用臨床標(biāo)本進行校準(zhǔn)驗證。

五、INR校準(zhǔn)（或賦值）及校準(zhǔn)（或賦值）驗證^［7］

（一）INR校準(zhǔn)（或賦值）方案

PT試劑批號變更時，實驗室應(yīng)根據(jù)制造商要求，選擇相應(yīng)的方式對待用批號試劑進行INR校準(zhǔn)或賦值。校準(zhǔn)（或賦值）驗證不通過時，需分析原因并糾正，再執(zhí)行校準(zhǔn)（或賦值）及驗證程序。

1.INR校準(zhǔn)：采用INR校準(zhǔn)品建立PT/INR校準(zhǔn)曲線，根據(jù)待測標(biāo)本的PT測定值，通過PT/INR校準(zhǔn)曲線計算對應(yīng)的INR值。

2.INR賦值：使用公式INR=（患者PT值÷健康人平均PT值）^ISI進行INR賦值。

ISI的來源：ISI可使用待用批號試劑說明書的賦值，也可使用商品化確認血漿（廠家提供）進行校準(zhǔn)，從而獲得本室的特定ISI值。

健康人平均PT值的建立：實驗室應(yīng)至少檢測20例表觀健康人標(biāo)本的PT值，計算其幾何均值作為MNPT值。

（二）INR校準(zhǔn)（或賦值）驗證物質(zhì)的選擇

實驗室可按照以下順序確定INR校準(zhǔn)（或賦值）驗證物質(zhì)：（1）商品化確認血漿：由廠家提供，賦有INR參考值；（2）另一批號INR校準(zhǔn)品：由廠家提供，賦有INR參考值；（3）采用在用批號試劑已測定的臨床標(biāo)本。

（三）使用校準(zhǔn)驗證物質(zhì)的校準(zhǔn)驗證方案

1.使用至少3份商品化校準(zhǔn)驗證物質(zhì)，覆蓋INR正常和（1.5~4.5）范圍，并包含醫(yī)學(xué)決定水平。

2.按照校準(zhǔn)驗證物質(zhì)的使用說明書操作，使用待用批次試劑對每份標(biāo)本重復(fù)測定2次，重復(fù)進行2 d，以排除日間變化。

3.計算每份標(biāo)本的批內(nèi)和批間CV，以及均值與所賦參考值的相對偏差。

4.每份INR確認血漿或校準(zhǔn)品的批內(nèi)和批間CV≤10%，檢測均值在所賦參考值的±15%內(nèi)。

（四）使用臨床標(biāo)本的校準(zhǔn)驗證方案

1.選擇在用批次試劑已測定的標(biāo)本至少5份，標(biāo)本水平應(yīng)覆蓋INR正常和（1.5~4.5）范圍，并包含醫(yī)學(xué)決定水平。

2.驗證程序參考“四、項目校準(zhǔn)及驗證：（三）使用臨床標(biāo)本的校準(zhǔn)驗證方案”。

3.結(jié)果判讀參考“四、項目校準(zhǔn)及驗證：（四）結(jié)果判讀”。

建議3 PT試劑批號變更時，實驗室應(yīng)按照制造商要求完成INR校準(zhǔn)（或賦值），并進行校準(zhǔn)（或賦值）驗證。

六、臨床標(biāo)本比對試驗^［3］

試劑批號變更時，常用血栓與止血項目均應(yīng)進行臨床標(biāo)本比對試驗，試驗流程參見圖2。

圖2 臨床標(biāo)本比對試驗的流程

（一）比對參數(shù)的確定

實驗室應(yīng)首先確定用于比對試驗的目標(biāo)檢測水平，確定每一目標(biāo)水平的CD、測量精密度（S_r、S_WRL）和預(yù)計統(tǒng)計功效，查詢文獻［3］里的對應(yīng)表格得到該目標(biāo)水平的拒絕限及驗證所需的標(biāo)本數(shù)量。

1.目標(biāo)檢測水平的確定：（1）待測標(biāo)本的目標(biāo)檢測水平應(yīng)至少包含正常水平和異常水平，并包含醫(yī)學(xué)決定水平?？蓞⒄召|(zhì)控物的水平設(shè)定驗證標(biāo)本的目標(biāo)檢測水平。對于具有多個醫(yī)學(xué)決定水平的項目，或?qū)嶒炇倚枰炞C其他測量區(qū)間的性能變化時，建議增加目標(biāo)檢測水平。（2）可根據(jù)（但不限于）目標(biāo)檢測水平×（1±20%）作為選擇待驗證標(biāo)本的數(shù)值范圍。

2. CD的確定：CD與檢測系統(tǒng)和目標(biāo)檢測水平有關(guān)，實驗室可按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會 EP26-A要求確定各項目批次間的CD，常用血栓與止血項目檢測試劑批次間的CD允許范圍見表3。

3.測量精密度的確定：實驗室可通過以下方式確定各項目在不同檢測水平的測量重復(fù)性（S_r）和試劑批次內(nèi)精密度（S_WRL）：（1）試劑制造商提供的使用說明書；（2）室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)：在試劑及質(zhì)控物批號均未改變的情況下，實驗室內(nèi)一定時期（≥20個工作日）在控質(zhì)控數(shù)據(jù)的期間測量精密度，即S_WRL；（3）精密度試驗：可參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求》和《D-二聚體定量檢測》實施^［8, 9］。其中，S_r對應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的批內(nèi)精密度；S_WRL對應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中使用單個試劑批次時的日間精密度。

4.預(yù)計統(tǒng)計功效的確定：統(tǒng)計功效的選擇主要取決于待評估項目檢測結(jié)果的變化對醫(yī)療決策的影響程度。若待評估項目的單個結(jié)果變化可能會影響醫(yī)療決策，統(tǒng)計功效宜選擇0.900或0.950；若待評估項目的單個結(jié)果變化對醫(yī)療決策不會產(chǎn)生實質(zhì)性影響，統(tǒng)計功效建議不低于0.800。

（二）臨床標(biāo)本的選擇

1.計算每個目標(biāo)水平對應(yīng)的CD/S_WRL和S_r/S_WRL比值。

2.根據(jù)目標(biāo)檢測水平的個數(shù)，選擇要查詢的文獻［3］里的對應(yīng)表格。

3.查詢文獻［3］里的對應(yīng)表格時，根據(jù)CD/S_WRL和S_r/S_WRL比值所在位置確定標(biāo)本例數(shù)（假陰性率，統(tǒng)計效能）的查詢位置，按拒絕限由大到小的順序，選取統(tǒng)計效能≥選定的統(tǒng)計功效，且假陰性率≤0.05時對應(yīng)的首個標(biāo)本例數(shù)和拒絕限。

4.當(dāng)實測值與表中的CD/S_WRL和S_r/S_WRL比值不一致時，應(yīng)選擇小于實測值最接近的表中所示值，以確保實際得到的統(tǒng)計功效優(yōu)于表中所示統(tǒng)計效能；當(dāng)CD/S_WRL超出表中最大所示值，應(yīng)選擇驗證所需的標(biāo)本量為1，拒絕限可選擇0.7×CD，使統(tǒng)計效能接近0.9；如按上述步驟得到驗證所需標(biāo)本量極大并難以實施、或統(tǒng)計效能過低、或無法查到可用數(shù)據(jù)，應(yīng)評估S_r和S_WRL數(shù)值，必要時加大CD值。

5.最終標(biāo)本總數(shù)不應(yīng)少于5例，宜覆蓋不同濃度。

1.根據(jù)“六、臨床標(biāo)本比對試驗：（二）臨床標(biāo)本的選擇”收集新鮮標(biāo)本。

2.確認儀器運行狀態(tài)正常，在用批號試劑的質(zhì)控結(jié)果在控。

3.待用批號試劑完成項目校準(zhǔn)后，在4 h內(nèi)完成在用批號和待用批號試劑對驗證標(biāo)本的單次檢測。

4. 計算單個標(biāo)本的試劑批號間偏差和同一目標(biāo)水平的試劑批號間平均偏差。

（1）單個標(biāo)本的試劑批號間偏差：

偏差（b_i）=待用批號結(jié)果-在用批號結(jié)果_i

（2）同一目標(biāo)水平的試劑批號間平均偏差：

平均偏差

（四）結(jié)果判讀

1.同一目標(biāo)水平的每個標(biāo)本的偏差（b_i）與拒絕限的比較：（1）若所有標(biāo)本的b_i均<拒絕限，且不存在同向偏移，則單個標(biāo)本比對通過；（2）若某一標(biāo)本b_i>拒絕限，需進一步比較b_i與同一目標(biāo)水平其他標(biāo)本的偏差，若b_i>，應(yīng)再選擇1例該水平范圍的標(biāo)本重新驗證；（3）若新標(biāo)本的b_i<拒絕限，應(yīng)以此替換第一次未通過驗證的標(biāo)本數(shù)據(jù)；若新標(biāo)本的b_i>拒絕限，需查找原因并糾正；（4）若同一目標(biāo)水平的偏差存在同向偏移，應(yīng)警惕系統(tǒng)誤差，需查找原因，糾正后重新驗證。

2.同一目標(biāo)水平的平均偏差的絕對值與拒絕限的比較：

（1）若<拒絕限，則該試劑的批次間驗證通過。

（2）若≥拒絕限，應(yīng)查找并糾正原因后再次驗證，若批號間差異仍存在，需查找原因并糾正。

建議4 實驗室應(yīng)選定待驗證標(biāo)本的目標(biāo)檢測水平，確定每一目標(biāo)水平的CD、檢測不精密度（S_r、S_WRL）和預(yù)計統(tǒng)計功效，查詢文獻［3］里的對應(yīng)表格得到該目標(biāo)水平的拒絕限及驗證所需的標(biāo)本數(shù)量。將上述參數(shù)制成表格，在檢測系統(tǒng)未發(fā)生變化時，用于試劑批號變更時的臨床標(biāo)本比對試驗。

七、儀器間比對試驗

當(dāng)實驗室有多臺相同檢測儀器時，校準(zhǔn)或賦值驗證后的項目宜進行儀器間比對。儀器間比對不通過時，需分析原因并糾正后再次進行儀器間比對。推薦使用臨床標(biāo)本進行儀器間比對試驗，標(biāo)本數(shù)≥5；目標(biāo)水平應(yīng)覆蓋線性范圍，包括醫(yī)學(xué)決定水平；在4 h內(nèi)完成靶機和比對儀器的單次檢測。結(jié)果 判讀可參考“四、項目校準(zhǔn)及驗證：（四）結(jié)果判讀”。

八、質(zhì)控物檢測

確認儀器運行狀態(tài)正常，在用批次試劑的質(zhì)控結(jié)果在控。使用待用批次試劑進行質(zhì)控物檢測，至少包括正常和異常2個水平。若質(zhì)控物結(jié)果在控，則為質(zhì)控物檢測通過；若臨床標(biāo)本比對試驗通過，而質(zhì)控物檢測未通過時，實驗室需在試劑批次變更后進行室內(nèi)質(zhì)控靶值適用性評估，必要時進行質(zhì)控靶值的累積和調(diào)整。

建議5 臨床標(biāo)本比對試驗通過，而質(zhì)控物檢測未通過時，實驗室需在待用批號試劑使用后，評估室內(nèi)質(zhì)控靶值的適用性，必要時進行靶值累積和調(diào)整。

九、參考區(qū)間驗證^{［2，10］}

更換試劑批號時，如在用和待用試劑敏感度差異明顯（例如PT、APTT等），應(yīng)至少收集20份表觀健康人的新鮮標(biāo)本進行參考區(qū)間驗證；如試劑敏感度接近（例如TT等），可使用至少5份表觀健康人標(biāo)本進行結(jié)果比對，以確認參考區(qū)間的適用性。若驗證未通過，實驗室應(yīng)重新檢查分析程序，必要時重新建立參考區(qū)間。