如何對熒光共定位進(jìn)行定量分析？

昵稱69125444 2020-09-20

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熒光共定位是很常見的實驗方法，一般用來驗證2種或3種蛋白是否存在共定位關(guān)系。在常規(guī)Protocol的指導(dǎo)下進(jìn)行實驗操作，很容易得到雙熒光或多重?zé)晒馊旧珗D像。

這種圖像，一般由紅色通道（代表蛋白A）和綠色通道（代表蛋白B）兩種圖像merge后得到。

（紅色通道：蛋白A）

（綠色通道：蛋白B）

僅僅通過肉眼和語言描述是很難說清楚蛋白A和蛋白B的共定位程度到底如何。因此，我們需要對這種共定位關(guān)系進(jìn)行定量分析。

今天的文章主要從操作上做出說明，之后將會從測量原理、分析、后期組圖上系統(tǒng)地說明。

圖文步驟

1. 請出老朋友Image Pro Plus，并打開一張共定位圖像。

2. 點擊Measure，選擇Co-localization。

3. 因為是紅綠通道，因此在彈窗中按照如下選項進(jìn)行設(shè)置，然后點擊Forward。

4.點完后，我們會得到一張圖像。

（這是紅色通道-綠色通道性形成的散點圖，可以看出散點幾乎都落在對角線上，說明紅綠通道相關(guān)性極強(qiáng)，且紅綠通道熒光強(qiáng)度基本相當(dāng)。）

5. 接著再次按照如下設(shè)置勾選，然后點擊Forward。

6. 然后我們會得到如下參數(shù)。

（數(shù)據(jù)是基于以上散點圖進(jìn)行回歸分析，得到的皮爾遜相關(guān)系數(shù)為0.919032，重疊系數(shù)R為0.932092，接近1，說明紅綠通道散點相關(guān)性極強(qiáng)?。?br>

7.總結(jié)一下，操作后我們得到紅綠通道散點圖、皮爾遜相關(guān)系數(shù)以及重疊系數(shù)，這三個要素是報告熒光共定位分析的最重要的數(shù)據(jù)，必須在論文中報告。

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