大家做實(shí)驗(yàn)，經(jīng)常要用到抗體，但是往往不知怎么選抗體，買到不好用的抗體，浪費(fèi)錢不說還耽誤時間。其實(shí)挑選抗體還是有些竅門和小“秘密”的，今天Dr. T就給大家分享一些。先說清楚，會提及一些公司名字，但Dr. T可沒有收任何廣告費(fèi)，還擔(dān)著造謠的責(zé)任，大家不相信就轉(zhuǎn)發(fā)500次試試吧！

挑選抗體首先看清楚此抗體能用于什么。一是能不能用于咱要做的實(shí)驗(yàn)類型，不同廠家標(biāo)注縮寫不同，但大體看一眼大家都懂，比如W或WB都是指Western blot，E指ELISA，還有IHC、IP、IF。不廢話，只是有一點(diǎn)，萬一找不到對應(yīng)的抗體怎么辦？沒辦法，只有賭一賭了。沒標(biāo)識只是代表廠家沒驗(yàn)證，不表示一定不行。二是能不能用于要檢測的物種（H、M、Rat等），不多解釋，這些大部分人都應(yīng)該清楚，但萬一也沒有怎么辦？

接下來呢，就是記住幾點(diǎn)好：

1.物種越遠(yuǎn)越好

物種越遠(yuǎn)，蛋白質(zhì)相似形性就越低，免疫識別就越容易，產(chǎn)生的抗體效價和特異性就越高。比如要檢測human的蛋白質(zhì)，那Chicken>Goat>Rabbit>Rat>mouse（“>”表示優(yōu)于）。這也是為什么兔單抗出來后，很多情況下比鼠單抗好用（對于檢測到是human的蛋白質(zhì)來講）的原因——物種更遠(yuǎn)了。兔單抗雖然看似貴些，稀釋比可能是1：2000，鼠單抗則大多是1：200左右，實(shí)際用起來，哪個才是真便宜，你懂的。

2.儲存條件-20°C的比4°C的好

一般4°C保存的抗體，保質(zhì)期說是多久（半年或者一年），基本就是那么久，甚至?xí)r間沒過保質(zhì)期也明顯變差了，-20°C的抗體保質(zhì)期說明書上可能只說一年，但實(shí)際上常常放上兩三年也仍好用。但各位看官前面別聽了我的話把說明書寫4°C保存的抗體放到-20°C去！凡是標(biāo)識為-20°C保存的抗體儲存液（Storage buffer）都是添加了40%～50%的Glycerol。干嘛的？就是防凍劑。有了它-20°C就不會凍起來，沒它可就難保了?？贵w也是蛋白質(zhì)，凍融一次就對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞一次，沒看見說明書上都寫著Avoid freeze / thaw cycle嗎！

3.儲存有BSA的比沒有的好

BSA——牛血清白蛋白。有什么用？蛋白質(zhì)保護(hù)劑。一般BSA濃度為1%，在儲存液中的含量遠(yuǎn)比抗體本身高，萬一不小心混入了蛋白酶，先降解的也是BSA。因此有BSA的就更穩(wěn)定、更耐降解一些。同時有了BSA，比單純只有抗體這一種蛋白質(zhì)時，抗體更不容易聚集、變性，也能起到一定程度的抗體穩(wěn)定作用——這兩者在血液里本來就是伙伴。

4.有圖的比沒圖的好

不管是WB還是IHC還是IF等，有圖的說明驗(yàn)證過，而且結(jié)果還不錯，沒圖的不是沒驗(yàn)證過，就是太難看不好意思放上去。但是圖里也有貓膩，我們下一集里再悄悄說。

5.多抗比單抗好

這里“好”的意思是指適用性更廣泛，效價更高，簡而言之就是不容易碰到不好用的。為啥呢？多抗，顧名思義是由很多種克隆的抗體組成的復(fù)合物，不同的克隆識別的表位不一樣，組合在一起就像是霰彈槍，不用怎么瞄準(zhǔn)也能打到，而單抗就是步槍，打不中就只有再瞄準(zhǔn)再打了（換另外的單克隆抗體）。因?yàn)閱慰贯槍Φ奈ㄒ粋€抗原表位，抗體結(jié)構(gòu)也是一樣，如果這表位在咱要做的體系里碰巧有糖基化、乙?；⒘姿峄鹊刃揎?，或者因?yàn)椴煌郫B方式的關(guān)系，表位被遮蔽甚至常在深處，單抗結(jié)合就會受到影響。所以大家留心看同一個蛋白質(zhì)的多抗的稀釋比，常常要高出單抗很多。不過對于抗體生產(chǎn)商來講，單抗的質(zhì)量更易控制，也易于生產(chǎn)規(guī)模的放大，導(dǎo)致他們更希望生產(chǎn)/賣單抗。另外，對于ELISA這樣的定量實(shí)驗(yàn)，單抗穩(wěn)定性重復(fù)性更好。因此抗體廠商不斷努力去篩選適用范圍廣、特異性好、效價高的單抗，慢慢的，好的單抗也多起來了，比如CST的XP?，Abcam的RabMAb?，Sigma的Prestige Antibodies?金標(biāo)抗體中的單抗就還不錯，這些百里挑一，經(jīng)多種驗(yàn)證的單抗效能接近多抗，有的還超過多抗，就不是普通步槍，而是狙擊步槍了，命中率就高了。（沒提到的勿怪，反正Dr.T沒收任何廣告費(fèi)，想起什么說什么，一時沒想起的，那也沒辦法了。

6.大公司的比小公司的好

唉～其實(shí)主要就是外國品牌的比國產(chǎn)的好，我沒有那樣說，因?yàn)槲沂侵袊恕？赡懿簧倏垂僦溃芏嗤鈬放频目贵w其實(shí)都是中國廠家生產(chǎn)，然后出去貼個牌又賣回中國而已，不過外國大品牌在質(zhì)控上面做的確實(shí)要好一些。而一些小廠的不是抗體本身不好，而是質(zhì)控做得不好，所以不同批次性能差別較大。但慢慢的我發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)品牌越來越重視質(zhì)控了，還有些國產(chǎn)品牌做的很好，結(jié)果被外國大公司給收購了。

7.文獻(xiàn)越多的越好

好些抗體公司會把引用此抗體的參考文獻(xiàn)放在網(wǎng)頁上去，哪個引用的多，自然驗(yàn)證過的人多，就會更可靠些。或者自己將貨號輸入谷歌學(xué)術(shù)去檢索一下，出來的文章越多，就越靠譜，謹(jǐn)慎點(diǎn)的看官還可以點(diǎn)進(jìn)去看看文獻(xiàn)做的應(yīng)用是不是自己要做的那種。有的公司還在商品頁面開了評論/論壇功能，用戶可以留言，弄得像某寶、某東一樣，挺好的。

8.重點(diǎn)在圖

“微信朋友圈”常常戲謔重點(diǎn)在文字，因?yàn)榇蠹叶紣劭磮D，確實(shí)，圖傳遞信息更快更有效，而且我們還可以從抗體實(shí)驗(yàn)展示圖中看出一些秘密。第一集第4點(diǎn)說過，有圖比沒圖的好，是指如果抗體說明里展示了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)圖片，就比較容易評估這個抗體怎么樣。IHC、IF等圖比較簡單，WB的圖就有很多“貓膩”要注意看了。

1）注意看上樣樣品是否是重組蛋白（即外源過表達(dá)的蛋白質(zhì)，全長或者部分）。外源過表達(dá)蛋白質(zhì)的量常常比內(nèi)源表達(dá)的多很多，可能圖上面外源過表達(dá)的檢測出來?xiàng)l帶很清晰、很純，但是真正檢測內(nèi)源蛋白的時候，這抗體的靈敏度或特異性可能就未必好了。而且Dr.T猜測，多半是內(nèi)源的檢測不到或者效果不好，所以只有放一個外源的檢測圖上來。下圖左邊是外源的，右邊是內(nèi)源的，最好挑右邊這種哦（雖然右邊的條帶不好看）！有的圖并沒寫清楚樣品是什么，那注意看一下條帶大小，與內(nèi)源的預(yù)測大小差很多的可能就是重組蛋白。

2）圖一樣的，本質(zhì)上就是同一個抗體。大家有沒有碰到過去不同公司網(wǎng)頁上找抗體，發(fā)現(xiàn)兩個公司的抗體的實(shí)驗(yàn)展示圖是一模一樣的，有木有？嘿嘿，其實(shí)這就是同一種抗體，不少所謂大公司，只是貼牌商，采購的小公司的抗體貼上自己的牌子。那這時候，哪個快、哪個便宜、選哪個就看你了，你懂的！