中心體控制細胞運動，極性和遷移，這被認為是由它們的微管組織能力介導(dǎo)的。5月29日加拿大多倫多西奈山醫(yī)院與多瑞爾森大學(xué)化學(xué)與生物系團隊在Nature Communications上發(fā)表了“Atypical function of a centrosomal module in WNT signalling drives contextual cancer cell motility”，文章證明WNT信號傳導(dǎo)驅(qū)動一種獨特形式的非定向細胞運動，需要一個關(guān)鍵的中心體模塊，而不是微管或中心體。在外泌體動員PCP蛋白時，顯示DVL2協(xié)調(diào)CEP192-PLK4/AURKB復(fù)合物向細胞皮質(zhì)的募集，其中PLK4/AURKB冗余地起作用以驅(qū)動前突活性和細胞運動性。這是通過用于DAAM2的皮質(zhì)局部DAAM1的置換來協(xié)調(diào)依賴于formin的肌動蛋白重塑來介導(dǎo)的。此外，PLK4，AURKB和DAAM1的異常表達與乳腺癌和膀胱癌的不良預(yù)后相關(guān)。因此，中心體模塊在WNT信號傳導(dǎo)和肌動蛋白成核中起非典型功能，這對于癌細胞運動是至關(guān)重要的，并且與更具侵襲性的癌癥相關(guān)。這些研究對于背景信號如何控制不同的細胞遷移模式具有廣泛的意義。

Figure 1：外泌體以中心體和MT非依賴性方式刺激基于肌動蛋白的非定向遷移。 a實驗示意圖。 b用DMSO或centrinone處理MDA-MB-231細胞。顯示了CETN1和CEP192染色. c（b）細胞的百分比> 4 centrioles，1≤centrioles≤4和0 centrioles。 d將MDA-MB-231細胞用DMSO或centrinone處理，然后與DMEM或ACM一起溫育過夜.數(shù)據(jù)與單向ANOVA Kruskal-Wallis檢驗進行比較，并使用Dunn多重比較進行后檢驗。e將來自（d）的MDA-MB-231細胞染色為α-微管蛋白，肌動蛋白和中心體。 f用PBS或純化的外泌體刺激的細胞的均方位移。 g來自用DMEM或ACM處理過夜的MDA-MB-231細胞的傷口愈合測定的定量數(shù)據(jù)。h用DMEM或ACM刺激MDA-MB-231細胞過夜。然后，在用DMSO或Nocodazole處理后進一步追蹤相同的細胞。i用ACM刺激MDA-MB-231細胞過夜。在刺激的最后添加DMSO或NOC。 j用DMEM或ACM刺激MDA-MB-231細胞過夜。追蹤細胞運動用DMSO，細胞松弛素B或細胞松弛素D處理細胞，并進一步追蹤。

Figure 2：CEP192的非中心體庫控制ACM誘導(dǎo)的運動性。 a，用Control，CEP192或PRICKLE1 siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，然后用ACM刺激過夜。然后將細胞染色α-微管蛋白和肌動蛋白。 b用DMSO或centrinone處理MDA-MB-231細胞。加入藥物后，用指定的siRNA轉(zhuǎn)染細胞，并進一步培養(yǎng)。孵育結(jié)束時用DMEM或ACM處理細胞過夜，并且拍攝延時圖像以跟蹤細胞運動性。 c用siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞。然后固定細胞并染色PCNT和α-微管蛋白。 d從三個獨立的實驗測量來自（c）的細胞中MTOC的α微管蛋白強度。 e細胞運動性測量為用指定的siRNA轉(zhuǎn)染的MDA-MB-231細胞的平均速度，然后用DMEM或ACM處理過夜。

Figure 3：PLK4和AURKB/C冗余調(diào)節(jié)ACM誘導(dǎo)的癌細胞運動。 a在DMEM或ACM存在下，用DMSO或不同濃度的CFI-400945處理MDA-MB-231細胞。 b在ACM刺激存在下，用DMSO或CFI-400945處理MDA-MB-231細胞。 c在DMEM或ACM存在下，用centrinone，centrinone B，AZD或它們的組合處理MDA-MB-231細胞過夜。 d（c）細胞染色α-微管蛋白和肌動蛋白，皮質(zhì)區(qū)域在右側(cè)板上擴大。 e將細胞與DMEM或ACM一起溫育過夜。在服用延時圖像時，將DMSO或抑制劑加入細胞中并繼續(xù)培養(yǎng)，然后洗去DMSO或抑制劑，并將細胞在DMEM或ACM中再培養(yǎng).  f在DMSO或抑制劑存在下，用DMEM或ACM處理乳腺癌細胞系EpRas和MDA-MB-468.

Figure 4：DVL2通過與PLK4，AURKB和CEP192結(jié)合來控制ACM誘導(dǎo)的癌細胞運動。 a從LUMIER篩選中鑒定的選定蛋白質(zhì)相互作用的網(wǎng)絡(luò)圖，測試CEP192，PLK4和AURKs對3個Flag標記的WNT-PCP和中心體因子的集合。 b用3Flag-CEP192和3HA-PLK4或3HA-DVL2共轉(zhuǎn)染HEK293T細胞。用抗Flag抗體免疫沉淀細胞裂解物，通過蛋白質(zhì)印跡檢測3HA-DVL2或3HA-PLK4。 c，d GST，GST-AURKB（c）和GST-PLK4（d）被細菌表達，純化并與或不與來自MDA-MB-231細胞的細胞裂解物一起溫育。進行GST下調(diào)，通過蛋白質(zhì)印跡檢測內(nèi)源性DVL2。 e用對照或DVL2 siRNA處理MDA-MB-231細胞，然后用DMEM或ACM刺激過夜.測量細胞運動性，并使用單因素ANOVA Kruskal-Wallis檢驗進行分析，并使用Dunn多重比較檢驗進行后測試。 f用對照或DVL2 siRNA轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達四環(huán)素可誘導(dǎo)的C末端HA標記的DVL2-wt，DVL2-N末端或DVL2-C末端的MDA-MB-231細胞。測量細胞運動性，并通過雙尾Mann-Whitney U檢驗進行分析。

Figure 5：DVL2協(xié)調(diào)突出時CEP192的募集。 a，c用對照，CEP192或DVL2 siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，然后用DMEM或ACM刺激過夜。對細胞進行染色（a）CEP192和肌動蛋白，或（c）CEP192和PCNT。 b，d，e CEP192在細胞皮質(zhì)（b），中心體（d）和中心體（e）的PCNT信號的強度進行測量。

Figure 6：細胞突起處的PLK4和AURKB積累取決于它們的特定活性。 a，c在MDO，Centrinone或AZD存在下用DMEM或ACM刺激MDA-MB-231細胞。對細胞染色肌動蛋白和（a）磷酸-PLK4，或（c）磷酸-AURKB。 b，測量（b）磷酸-PLK4（S305）或（d）來自（a）和（c）中細胞的磷酸-AURKB（T232）在皮質(zhì)區(qū)域的強度。磷酸-PLK4（e）和磷酸-AURKB（f）在細胞皮質(zhì)中定位的模型，以促進獨立于其他激酶活性發(fā)生的突起形成。

Figure 7：DVL2和CEP192在細胞突起處協(xié)調(diào)PLK4和AURKB的募集。 a，c用對照，PLK4，AURKB，CEP192或DVL2 siRNA轉(zhuǎn)染的MDA-MB-231細胞用DMEM或ACM刺激過夜。對細胞染色肌動蛋白和（a）磷酸-PLK4，或（c）磷酸-AURKB。（b）的磷酸PLK4，或（d）磷酸AURKB在皮層區(qū)域從在（a）和（c）中的細胞中測量。 （e）磷酸-PLK4（S305）和（f）磷酸-AURKB（T232）在細胞皮質(zhì)中募集和定位以促進通過DVL2和CEP192形成突起的模型。

Figure 8：DVL2有助于AURKB從細胞核輸出和PLK4穩(wěn)定化。 a用對照或DVL2 siRNA處理MDA-MB-231細胞，然后用DMEM或ACM刺激過夜。對細胞進行肌動蛋白，AURKB和細胞核（DAPI）染色。 b在DMSO或細胞出口抑制劑Leptomycin存在下，用DMEM或ACM刺激MDA-MB-231細胞過夜。用α-微管蛋白，AURKB和DAPI染色細胞。 c，d分別對來自（a）和（b）中細胞的AURKB的核與細胞質(zhì)（N/C）比率進行定量。 e在DMSO，LMB或LMB + centrinone存在下，用DMEM或ACM刺激細胞過夜。 f用于DVL2調(diào)節(jié)AURKB的核和細胞質(zhì)/皮質(zhì)池的模型。 g用3HA-PLK4,3 Flag-BTRC和增加量的T7-DVL2-wt或T7-DVL2突變體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞。 h在增加量的DVL2存在下PLK4和BTRC之間結(jié)合的定量顯示為免疫沉淀物中HA-PLK4/3F-BTRC的平均信號比。 i 為DVL2介導(dǎo)的PLK4穩(wěn)定模型。

Figure 9：PLK4和AURKB通過DAAM調(diào)節(jié)細胞運動。 a在DMSO，CK666或SMIFH2存在下，用DMEM或ACM刺激MDA-MB-231細胞過夜。 b用對照或SPIRE1 siRNA轉(zhuǎn)染細胞，然后用DMEM或ACM處理過夜。 c用對照，DAAM1或DAAM2個體siRNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染細胞，然后用DMEM或ACM刺激過夜。 d在DMSO或centrinone+AZD存在下，用DMEM或ACM刺激（e）MDA-MB-231細胞。 f，g用對照，DAAM2或DAAM1 siRNA轉(zhuǎn)染細胞，然后DMEM或ACM刺激過夜。對肌動蛋白和（f）DAAM1或（g）DAAM2染色細胞。 h用對照，DAAM1，DAAM2 siRNA或指定的組合轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，然后用DMEM或ACM刺激過夜。 i用對照，DAAM1或DAAM2 siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞，然后在DMSO或centrinone+AZD存在下用DMEM或ACM刺激過夜。 j由PLK4和AURKB調(diào)節(jié)的ACM處理后細胞皮層DAAM1和DAAM2定位開關(guān)的模型。