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從原代組織樣本中制備真正的單細(xì)胞懸浮液可避免過量的細(xì)胞損失并且能夠最大化標(biāo)記靶細(xì)胞，從而優(yōu)化細(xì)胞分選。以下實(shí)驗(yàn)步驟概述了如何從脾臟樣本中收集細(xì)胞，并制備成單細(xì)胞懸液以進(jìn)行下游細(xì)胞分選。 實(shí)驗(yàn)步驟 1. 將脾臟組織轉(zhuǎn)移到35 mm無菌培養(yǎng)皿（產(chǎn)品號(hào) #27100/27150）中。后續(xù)如需進(jìn)行細(xì)胞分選，在培養(yǎng)皿中加入5 mL推薦培養(yǎng)基（請參閱試劑盒產(chǎn)品說明書）。如解離組織后不需細(xì)胞分選，請?jiān)谂囵B(yǎng)皿中加入含1 mM EDTA的PBS。 注意: 如同時(shí)處理多個(gè)脾臟樣本，需使用100 mm培養(yǎng)皿（產(chǎn)品號(hào) #27125/27127），并加入10 mL培養(yǎng)基。 
2. 去除脾臟組織上的結(jié)締組織或脂肪，注意壞死區(qū)域，并檢查脾臟是否有腫大、變色或病變。記錄起始樣本的狀態(tài)對于后期評(píng)估細(xì)胞非常重要。 3. 從3 cc無菌注射器（產(chǎn)品號(hào) #28230/28240）中取出活塞/柱塞。使用扁平的末端部分以溫和畫圓的方式研磨脾臟5次。這樣可以破壞脾臟和髓質(zhì)，釋放脾細(xì)胞。 
4. 將一個(gè)70 μm細(xì)胞過濾器（產(chǎn)品號(hào) #27216/27260）置于50 mL無菌錐形管上，并用2 mL推薦培養(yǎng)基潤洗濾網(wǎng)。 注意：細(xì)胞可能會(huì)黏附于干燥的濾網(wǎng)上，潤洗濾網(wǎng)可以減少這種情況 。 
5. 使用潤洗過的5 mL或10 mL移液管將脾細(xì)胞吹打均勻。 6. 將上清液和組織從培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移至潤洗過的70μm細(xì)胞過濾器（產(chǎn)品號(hào) #27216/27260）。使用一個(gè)新的3 cc無菌注射器的活塞/柱塞，以溫和畫圓的方式使細(xì)胞和組織通過濾網(wǎng)。用3 mL推薦培養(yǎng)基沖洗濾網(wǎng)。 
如需提高回收率，可選擇進(jìn)行此步驟： a. 只將上清液而不要將脾臟組織移入過濾器。在培養(yǎng)皿中另加入5 mL推薦培養(yǎng)基。 注意：如果一次處理多個(gè)脾臟可加入10 mL推薦培養(yǎng)基。 b. 重復(fù)步驟4-6，在培養(yǎng)皿中加入推薦培養(yǎng)基（5 mL或10 mL）直至脾臟組織變白且培養(yǎng)基呈現(xiàn)澄清狀態(tài)。
7. 使用3 mL推薦培養(yǎng)基再次沖洗濾網(wǎng)。 
8. 離心300 x g，10分鐘來收集細(xì)胞。 
9. 小心棄去上清。 
10. 輕輕敲擊試管重懸細(xì)胞。 
11. 如有需要，可在試管中加入40 mL推薦培養(yǎng)基，進(jìn)行第二次洗滌。重復(fù)步驟8-10。 12. 脾細(xì)胞可用于下游應(yīng)用。無需去除紅細(xì)胞！ 
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