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【舊帖整理】miRNA、siRNA、RNA干擾原理,步驟及相關(guān)問題總結(jié)

 ypgao 2018-09-25
RNA干擾(RNAi):近年來的研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發(fā)生特異性的降解,導致其相應的基因沉默。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被稱為RNA干擾(RNAi)。

MicroRNA(miRNA,微RNA):即為長度為22nt左右的5′端帶磷酸基團、3′端帶羥基的非蛋白編碼的調(diào)控小RNA家族。

小的干涉RNA(siRNA):是在RNA干涉過程中人工體外合成的小片段RNA,由約20個堿基對組成,包括5個磷酸鹽,2個核苷和3個懸臂。

miRNA與siRNA之間有許多相同之處:1.二者的長度都約在22nt左右。2.二者都依賴Dicer酶的加工,是Dicer的產(chǎn)物,所以具有Dicer產(chǎn)物的特點。3.二者生成都需要Argonaute家族蛋白存在。4.二者都是RISC組分,所以其功能界限變得不清晰,如二者在介導沉默機制上有重疊。5.miRNA和siRNA合成都是由雙鏈的RNA或RNA前體形成的。

miRNA與siRNA的不同點:1.根本區(qū)別是miRNA是內(nèi)源的,是生物體的固有因素;而siRNA是人工體外合成的,通過轉(zhuǎn)染進入人體內(nèi),是RNA干涉的中間產(chǎn)物。2.結(jié)構(gòu)上,miRNA是單鏈RNA,而siRNA是雙鏈RNA。3.Dicer酶對二者的加工過程不同,miRNA是不對稱加工,miRNA僅是剪切pre-miRNA的一個側(cè)臂,其他部分降解;而siRNA對稱地來源于雙鏈RNA的前體的兩側(cè)臂。4.在作用位置上,miRNA主要作用于靶標基因3′-UTR區(qū),而siRNA可作用于mRNA的任何部位。5.在作用方式上,miRNA可抑制靶標基因的翻譯,也可以導致靶標基因降解,即在轉(zhuǎn)錄水平后和翻譯水平起作用,而siRNA只能導致靶標基因的降解,即為轉(zhuǎn)錄水平后調(diào)控。6.miRNA主要在發(fā)育過程中起作用,調(diào)節(jié)內(nèi)源基因表達,而siRNA不參與生物生長,是RNAi的產(chǎn)物,原始作用是抑制轉(zhuǎn)座子活性和病毒感染。

miRNA分離\純化\測序
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siRNA轉(zhuǎn)染陰性對照http://www.....cn/bbs/post/view?bid=64&id=7151795&sty=1&tpg=1&age=0
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