建庫(kù)，即文庫(kù)制備，是指將樣本處理成可被測(cè)序儀讀取的DNA片段，該片段需滿足一定的長(zhǎng)度，且在兩端都連接了指定的序列（錨定序列、測(cè)序引物序列、標(biāo)簽序列等）。

目前市面上尚未有成熟的建庫(kù)自動(dòng)工作站，因此建庫(kù)工作基本都靠實(shí)驗(yàn)室人員手工操作，建庫(kù)結(jié)果取決于采用的實(shí)驗(yàn)方案、試劑種類、熟練程度等諸多因素影響。可以毫不夸張的說(shuō)，建庫(kù)工作量占了整個(gè)高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)中工作量的80%，其結(jié)果直接決定了測(cè)序下機(jī)數(shù)據(jù)的好壞。

原理上，市面上的建庫(kù)試劑盒主要為三種建庫(kù)方法：機(jī)器打斷法，轉(zhuǎn)座酶法，擴(kuò)增法。

如何建庫(kù)，這里不詳述。大家感興趣，可以參照咱們之前的討論貼。或者也可以申請(qǐng)參加我單位每年針對(duì)疾控系統(tǒng)開(kāi)展的建庫(kù)及高通量測(cè)序?qū)嵅倥嘤?xùn)班。

高通量測(cè)序DNA樣本建庫(kù)方法（1）：機(jī)器打斷法

高通量測(cè)序DNA樣本建庫(kù)方法（2）：轉(zhuǎn)座酶建庫(kù)法

高通量測(cè)序DNA樣本建庫(kù)方法（3）：擴(kuò)增法

今兒咱們主要聊聊什么樣的文庫(kù)才叫好文庫(kù)！

好文庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)：連接上接頭的文庫(kù)濃度達(dá)標(biāo) 及文庫(kù)片段長(zhǎng)度達(dá)標(biāo)

常用檢測(cè)方法如下：（1）Nanodrop；（2）Qubit；（3）凝膠電泳；（4）Angilent2100及類似產(chǎn)品。

（1）Nanodrop

原理：紫外吸收法

檢測(cè)目的：文庫(kù)中DNA的量

缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度較低，容易受文庫(kù)樣本中殘存RNA、蛋白、鹽和其他雜質(zhì)的影響。

優(yōu)點(diǎn)：a)無(wú)需其他耗材，便宜！b）秒級(jí)檢測(cè)，方便。c）用量低，1ul。

總結(jié)：適合作為文庫(kù)樣本的初檢或不具有其他高靈敏度檢測(cè)方法時(shí)的替代品。

(2) Qubit

原理：熒光染料法

檢測(cè)目的：文庫(kù)中DNA的量

缺點(diǎn)：需額外購(gòu)買染料、標(biāo)準(zhǔn)品和配套的小管。小貴。

優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確。排除RNA等雜質(zhì)的感染

總結(jié)：Nanodrop精準(zhǔn)版。追求質(zhì)量的選用。

（3）凝膠電泳

詳情可參照前貼：

病原菌高通量測(cè)序及WGS建庫(kù)應(yīng)用（視頻版）

原理：這就不用說(shuō)了吧。。。

檢測(cè)目的：文庫(kù)不同長(zhǎng)度的分子片段的分布情況是否合適。如小片段過(guò)多，或文庫(kù)長(zhǎng)度過(guò)長(zhǎng)皆會(huì)影響后續(xù)測(cè)序?qū)嶒?yàn)。

優(yōu)點(diǎn)：便宜；方便

缺點(diǎn)：結(jié)果粗略。

（4）Angilent2100及其類似產(chǎn)品

原理：毛細(xì)管電泳

檢測(cè)目的：文庫(kù)不同長(zhǎng)度的分子片段的分布情況是否合適。如小片段過(guò)多，或文庫(kù)長(zhǎng)度過(guò)長(zhǎng)皆會(huì)影響后續(xù)測(cè)序?qū)嶒?yàn)。

優(yōu)點(diǎn)：精準(zhǔn)；結(jié)果可量化；可形成圖表報(bào)告。

缺點(diǎn)：需購(gòu)買配套的芯片和膠。小貴！

總結(jié)：凝膠電泳的土豪版。追求質(zhì)量的選用

總而言之，

                      文庫(kù)質(zhì)量很重要，

                      質(zhì)量控制要做好！

                      簡(jiǎn)單Nano+跑膠，

                      精準(zhǔn)Qubit毛細(xì)管。