今天小編要給大家分享的題目是《2,5-Hexanedione induces autophagic death of VSC4.1 cells via a PI3K/Akt/mTOR pathway》(回復(fù)170807可下載文獻(xiàn)，一周有效)，由文章的題目可知該文章是一個常見信號通路的類型，閱讀者從題目可熟知的信息量則為：

在該文章中自噬是主要事件，2,5-Hexanedione，2,5-己二酮（HD） 是一個誘導(dǎo)劑，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，VSC4.1細(xì)胞系是事件發(fā)生的主體，而本文就是探討誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)主體發(fā)生主要事件的機(jī)制，那快來跟著小編看看新鮮總結(jié)的吧!

首先：發(fā)現(xiàn)現(xiàn)象HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬和死亡；

其次：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與信號因子PI3k之間的關(guān)系；

再次：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與信號因子Akt之間的關(guān)系；

第四：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與信號因子mTOR之間的關(guān)系；

最后：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與 PI3K/Akt/mTOR通路之間的關(guān)系。

為了方便大家理解，小編特異搜索一個網(wǎng)站探索三者之間的信號網(wǎng)絡(luò)關(guān)系：

絲氨酸/蘇氨酸激酶 Akt（又稱作蛋白激酶 B 或 PKB）作為一種原癌基因，Akt 調(diào)控多個生物過程，包括細(xì)胞存活、增殖、生長和糖原代謝。PI3K 相關(guān)激酶 (PIKK) 家族成員，包括 DNA-PK，也同樣能在 Akt 絲氨酸 473 位點將其磷酸化。Akt 通過作用于 TSC1/TSC2 復(fù)合體以及 mTORC 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長。

哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是一種非典型的絲氨酸/蘇氨酸激酶，存在于兩個不同的復(fù)合體中。第一個為 mTOR 復(fù)合體 1 (mTORC1)，乳動物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是一種非典型的絲氨酸/蘇氨酸激酶，存在于兩個不同的復(fù)合體中。第一個為 mTOR 復(fù)合體 1 (mTORC1)，由 mTOR、Raptor、GβL 和 DEPTOR 構(gòu)成，受 rapamycin 抑制。第二種復(fù)合體是 mTOR 復(fù)合體 2 (mTORC2)，由 mTOR、Rictor、 GβL、 Sin1、PRR5/Protor-1 和 DEPTOR 構(gòu)成。

發(fā)現(xiàn)2,5-己二酮誘導(dǎo)劑可以誘導(dǎo)VSC4.1細(xì)胞自噬

培養(yǎng)VSC4.1細(xì)胞，并用三個不同劑量的2,5-己二酮（HD）處理之后，作者利用免疫印跡，免疫熒光以及電鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)了HD誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的現(xiàn)象，并且細(xì)胞自噬具有劑量依賴性。

LC3位于細(xì)胞質(zhì)，是自噬的標(biāo)記性蛋白

發(fā)現(xiàn)HD誘導(dǎo)自噬細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象

過度的自噬能夠誘導(dǎo)自噬細(xì)胞的凋亡，為了檢測是否是HD誘導(dǎo)自噬細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡，用HD處理細(xì)胞24h后，然后用乳酸脫氫酶（LDH）檢測細(xì)胞的凋亡情況，結(jié)果顯示自噬的程度越高細(xì)胞凋亡的越多，兩者呈正相關(guān)的關(guān)系。

美膩膩的分割線。。。。。。以上便是主要事件發(fā)生在主體上的過程-HD誘導(dǎo)了細(xì)胞發(fā)生自噬，并且到一定濃度劑量時細(xì)胞發(fā)生死亡，那么接下來就看機(jī)制了。。。

HD與PI3K

在HD和PI3K共在的情況下，細(xì)胞凋亡還是比對照組較高，但是 HD誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在PI3K的存在下還是得到了緩解。利用免疫熒光和免疫印跡技術(shù)檢測這些結(jié)果表明HD誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡能夠被PI3K所阻斷。

HD與Akt

在調(diào)節(jié)自噬神經(jīng)元死亡中 PI3K/Akt發(fā)揮了重要的作用，而且Akt是PI3K的下游的重要因子。為了檢測PI3K/Akt的通路是不是受HD所調(diào)控和影響，在VSC4.1細(xì)胞中加入HD分三個劑量濃度處理24h，然后用蛋白檢測Akt的表達(dá)水平。

Akt的表達(dá)水平在HD處理后沒有發(fā)生變化，但是磷酸化的Akt顯著的下降并且具有劑量依賴性。為了深入了解以上的結(jié)果，HD處理 VSC4.1細(xì)胞之后，然后分別加入或者不加入740Y-P，740Y-P是PI3K的激活劑。在740Y-P存在的情況下，下降的Akt水平被回升。這表明HD阻止了PI3K/Akt的信號通路。

HD與mTOR 

蛋白檢測在VSC4.1細(xì)胞中，HD誘導(dǎo)下mTOR以及磷酸化mTOR的變化，結(jié)果表明磷酸化mTOR的水平與對照組相比顯著下降，而且呈現(xiàn)劑量依賴性。為了檢測mTOR的下降活性與抑制PI3K/Akt的通路相關(guān)，HD誘導(dǎo)的VSC4.1細(xì)胞處理740Y-P或者SC79。這些結(jié)果表明mTOR的失活抑制了PI3K/Akt通路。

備注：條形圖為蛋白灰度值統(tǒng)計結(jié)果圖

HD與PI3K/Akt/mTOR

為了檢測HD誘導(dǎo)的過度自噬能夠?qū)е录?xì)胞死亡是通過PI3K/Akt/mTOR通路，作者將HD-極度興奮的細(xì)胞用 740Y-P或SC79或 3BDO處理。用免疫熒光，免疫印跡及電鏡技術(shù)檢測細(xì)胞自噬的活性變化。

結(jié)果表明：與對照組相比， 740Y-P和SC79以及3BDO組，LC3標(biāo)記的自噬細(xì)胞數(shù)目顯著減少，LC3-II/LC3-I的表達(dá)比例顯著增高。HD的誘導(dǎo)細(xì)胞自噬會被PI3K和Akt以及mTOR的激活因子所緩解，表明HD誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬之后的凋亡是通過抑制PI3K/Akt/mTOR 通路。

以上便是該信號通路PI3K/Akt/mTOR的主要內(nèi)容，本文通過分總的方式，以免疫熒光，蛋白水平以及電鏡的主要實驗方法證明這條通路，怎么樣，有沒有套路到什么？