【關(guān)鍵詞】  高效液相色譜法；醋酸亮丙瑞林；測(cè)定

【摘要】  目的  采用高效液相色譜法測(cè)定醋酸亮丙瑞林注射液中醋酸亮丙瑞林的含量。方法  采用Diamonsil鉆石C18柱（250mm×4.6mm 5μm）；以磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加水950ml，用氨水調(diào)節(jié)pH值為7.0）-乙腈（70：30）為流動(dòng)相；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。結(jié)果  醋酸亮丙瑞林在9.66～86.94mg/ml的范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，方法平均回收率為98.90%（RSD＝0.50%）。結(jié)論  本方法簡(jiǎn)單、高效、耐用性好。

【關(guān)鍵詞】  高效液相色譜法；醋酸亮丙瑞林；測(cè)定

     【Abstract】  Objective  To establish HPLC method for determination of leuprorelin acetate injection.Methods  The column:Diamonsil C18（250mm×4.6mm 5μm）；The mobile phase:Ammonium dihydrogen phosphate solution （dissolve about 11.5g of ammonium dihydrogen phosphate in 950ml of water，adjust to pH 7.0 with ammonia water）-acetonitrile （70:30）；The flow rate:1.0ml/min；The detection wavelength was 220nm.Results  It had a good linearity over the concertration range of 9.66～86.94mg/ml；The average recovery was 98.90% with RSD of 0.50%.Conclusion  This method is simple，rapid and satisfaction.

    【Key words】  HPLC；leuprorelin acetate；determination

    醋酸亮丙瑞林（Leuprorelin Acetate）是一種人工合成的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的9肽化合物，是內(nèi)源性GnRH的高活性衍生物，1985年，美國(guó)FDA首次批準(zhǔn)亮丙瑞林、利普安（包括日注射制劑與緩釋制劑）入市，用于治療晚期前列腺癌。目前該藥主要在臨床上用于治療前列腺癌，同時(shí)在治療兒童中樞性性早熟和女性子宮內(nèi)膜異位癥等疾病也有一定效果。為了能有效地控制本品的質(zhì)量，本文系統(tǒng)研究了采用HPLC法［1］測(cè)定其含量，結(jié)果表明該方法可行。

1  儀器與試藥

    高效液相色譜儀：Agilent 1100（安捷倫科技開(kāi)發(fā)有限公司）；醋酸亮丙瑞林注射液：批號(hào)040501、040502、040503，規(guī)格2.8ml:14mg，由揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)；亮丙瑞林對(duì)照品；批號(hào)：lot 093k1628，純度：100%，肽含量：77%，由SIGMA公司提供；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2  方法與結(jié)果

    2.1  色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)  色譜性Diamonsil鉆石C18柱（250mm×4.6mm 5μm）；流動(dòng)相磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加水950mnl，用氨水調(diào)節(jié)pH值為7.0）-乙腈（70：30）為流動(dòng)相；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm；進(jìn)樣量20μl。理論板數(shù)按亮丙瑞林峰計(jì)應(yīng)不低于3000。

    2.2  線性試驗(yàn)  精密稱取對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解稀釋制成每1ml含9.66μg、28.98μg、48.30μg、67.62μg、86.94μg的溶液。分別取上述各溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以亮丙瑞林濃度C對(duì)峰面積A進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A＝0.5655C+23.332（R2＝0.9996），結(jié)果表明，醋酸亮丙瑞林溶液在9.66～86．94μg/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

    2.3  空白試驗(yàn)  按處方量配制空白溶液，按上述色譜條件，取20μl注入色譜儀記錄色譜圖。結(jié)果輔料中有較大的色譜峰，其保留時(shí)間為6.433min。而主藥的保留時(shí)間為9min左右。輔料與樣品能完全分離，因此輔料不干擾測(cè)定。

    2.4  進(jìn)樣精密度  精密稱取對(duì)照品14.10mg，用流動(dòng)相溶解稀釋制成56.40μg/ml的溶液作為供試品溶液。照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。測(cè)得峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）為0.16%。

    2.5  溶液的穩(wěn)定性  取一批樣品，按2.7項(xiàng)制備供試品溶液。照上述色譜條件，分別在0、2、4、6和8h時(shí)取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測(cè)得平均峰面積為58.12（RSD＝0.62%），結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定，滿足測(cè)定要求。

    2.6  回收率試驗(yàn)  按標(biāo)示量的80%、100%、120%分別精密稱取亮丙瑞林對(duì)照品各3份，分別加入處方量的輔料，用流動(dòng)相制成每1ml約含40μg、50μg、60μg的溶液作為供試品溶液。另取亮丙瑞林對(duì)照品適量，同2.7項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果測(cè)得平均回收率為98.90%（RSD＝0.50%），表明該方法回收率良好，輔料不干擾測(cè)定。

    2.7  樣品的測(cè)定  精密量取本品1ml，加流動(dòng)相稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液，作為供試品溶液。另精密稱取亮丙瑞林對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解，并定量稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果乘以1.050。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1  含量測(cè)定結(jié)果

3  討論

    3.1  流動(dòng)相比例的選擇  為建立良好的色譜條件，對(duì)磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加水950ml，用氨水調(diào)節(jié)pH值為7.0）和乙腈的比例進(jìn)行了篩選，當(dāng)二者比例為70：30時(shí)，主峰保留時(shí)間適中，且主峰與雜質(zhì)峰分離度較好，滿足測(cè)定要求。

    3.2  耐用性  采用所選色譜條件，用Diamonsil C18 4.6mm×150mm，5μm色譜柱和Waters C18 4.6mm×150mm，5μm色譜柱進(jìn)行了相同試驗(yàn)，結(jié)果使用不同品牌的色譜柱均能得到較好的色譜峰，表明本方法耐用性良好，符合測(cè)定要求。

    【參考文獻(xiàn)】

    1  國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，2000年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000，2部.

     作者單位： 225321 江蘇泰州，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)藥物研究院

　  （編輯：汪  洋）