氟哌酸（又名諾氟沙星）檢測(cè)

摘要

　　廣譜抗生素。無(wú)臭，味微苦；在空氣中能吸收水分，遇光色漸變深。本品在二甲基甲酰胺中略溶，在水或乙醇中極微溶解，在醋酸、鹽酸或氫氧化鈉溶液中易溶。本品的熔點(diǎn)為218～224℃。本品為膠囊劑，內(nèi)容物為白色至淡黃色粉末。 
　　

藥理毒理

本品為氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥，具廣譜抗菌作用，尤其對(duì)需氧革蘭陰性桿菌的抗菌活性高，對(duì)下列細(xì)菌在體外具良好抗菌作用：腸桿菌科的大部分細(xì)菌，包括枸椽酸桿菌屬、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌等腸桿菌屬、大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形菌屬、沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、弧菌屬、耶爾森菌等。對(duì)多重耐藥菌亦具抗菌活性。對(duì)青霉素耐藥的淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌亦有良好抗菌作用。諾氟沙星為殺菌劑，通過(guò)作用于細(xì)菌DNA螺旋酶的A亞單位，抑制DNA的合成和復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。
　　

實(shí)驗(yàn)分析

方法名稱(chēng)

高效液相色譜法測(cè)定氟哌酸的含量。

方法原理　　將待測(cè)品溶液注入高效液相色譜儀，利用C18色譜柱進(jìn)行色譜分離，采用紫外吸收檢測(cè)器于278nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)。參照標(biāo)準(zhǔn)品譜圖保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量計(jì)算諾氟哌酸含量。
試劑
　　1.0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0）
　　2.乙腈（色譜純）
　　3.三乙胺溶液

4. 0.1mol/L鹽酸溶液

5.超純水或二次蒸餾水
　儀器及設(shè)備
　　1.高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器)

2.超聲波

3.溶劑過(guò)濾器裝置

4.針筒式過(guò)濾器 

5.振蕩儀

6.100ul微量進(jìn)樣器
　色譜條件
　　色譜柱：Venusil ASB C18 色譜柱（4.6×250mm，5μm）

         S/N:S9520525B10050

流動(dòng)相：0.025mol/L磷酸溶液：乙腈=87%：13%（V:V）

流速：1.0ml/min
　　檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm

進(jìn)樣量：20ul（手動(dòng)進(jìn)樣，20ul定量環(huán)）
　　柱溫：室溫
　試樣制備
　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備　　

精密稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品適量，加流動(dòng)相溶液溶解并配制成每mL含25μg的溶液，即25μg/ml，振蕩儀搖勻，微膜過(guò)濾，備用。

　　2.樣品溶液的制備
　　精密稱(chēng)取本品0.2g，置100mL容量瓶中，并加入0.1mol/L鹽酸溶液20mL使溶解后，加超純水或二次蒸餾水稀釋至刻度，振蕩儀搖勻，精密量取1mL，置10mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，振蕩儀搖勻，微膜過(guò)濾，備用。
　　測(cè)試操作步驟
　　按以上色譜條件，依次精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品溶液各60μL注入高效液相色譜儀，通過(guò)外標(biāo)法計(jì)算出氟哌酸含量。
標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如下：

最小檢出限測(cè)試：

按以上色譜條件進(jìn)0.25μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液，計(jì)算得最小檢出限0.01μg/ml.

色譜圖如下：

精確度測(cè)試：

按以上色譜條件對(duì)同一樣品連續(xù)進(jìn)樣6次，精確度誤差定性RSD=0 38%，定量RSD=0.63%。

測(cè)試圖譜如下：

準(zhǔn)確度測(cè)試：

分別配制濃度0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.5μg/ml、10μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，待儀器穩(wěn)定后，按以上色譜條件，依次進(jìn)樣，并計(jì)算，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：Y = 4.0924 e - 0.005 * X + 1.3686，相關(guān)系數(shù)：R=0.9998。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖如下：

樣品的測(cè)定：

按以上色譜條件進(jìn)樣品溶液，色譜圖如下：

結(jié)論

利用此方法檢測(cè)氟哌酸具有準(zhǔn)確、可靠，檢出限低，峰形好，出峰快，前處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。本方法適合氟哌酸含量的檢測(cè)。