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如何溶解稀釋引物

 cfplhys 2011-06-22
◆干粉引物溶解稀釋方法:

     收到引物后,在開啟離心管蓋前在12000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘,以防開蓋時(shí)引物干粉散失。引物保存在高濃度的狀況下比較穩(wěn)定。如果對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高,合成的OD數(shù)較大,建議分裝,避免反復(fù)凍融。引物一般配制成10-100pmol/ul(umol/l)。

三博遠(yuǎn)志的引物在出廠時(shí)都標(biāo)有1OD 相當(dāng)于多少umol 的計(jì)算結(jié)果,進(jìn)行稀釋時(shí)的引物加水量可以按以下公式計(jì)算:

    稀釋成100pmol/ul   1OD 需加水量(ul)=1OD相當(dāng)于umol 數(shù)×10000

     例如,您拿到的引物DNA合成報(bào)告單上標(biāo)有1OD≈0.0035umol ,包裝量是1OD/管,如果您希望將引物濃度定為100umol/L,那么只需用35ul無核酸酶的雙蒸水將1OD的引物干粉溶解即可。

     ◆液體引物再稀釋可用下列公式:

稀釋引物要達(dá)到的濃度(pmol/ul或umol/l)=母液濃度(pmol/ul或umol/l)×汲取母液的體積(ul)÷(汲取母液的體積(ul)+加水量(ul))

例如,需要上引和下引共2微升,稀釋上引物和下引物要達(dá)到的濃度均為5um/l,母液濃度均為100 um/l

那么,對(duì)于上引物來說5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷2微升  汲取上引物母液的體積(ul)=0.1微升

     對(duì)于下引物來說5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷2微升  汲取下引物母液的體積=0.1微升

     需要的超純水為2-0.1-0.1=1.8微升

 

如果防止每次都再稀釋,那么可以先把母液(上引和下引)稀釋成100微升,上引和下引濃度均為5um/l,計(jì)算方法如下:

對(duì)于上引物來說 5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷100微升  汲取上引物母液的體積(ul)=5微升

對(duì)于下引物來說5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷100微升  汲取下引物母液的體積=5微升

     需要的超純水為100微升-5微升-5微升=90微升

 

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