抗體的生物素（Biotin）標(biāo)記。一般每個(gè)抗體可以標(biāo)記3-5個(gè)生物素，標(biāo)記時(shí)，生物素與抗體的比率受抗體濃度影響，對(duì)于10 mg/ml 的抗體溶液來(lái)說(shuō)，生物素應(yīng)超過(guò)抗體12倍（摩爾數(shù)），對(duì)于2 mg/ml 的抗體溶液應(yīng)超過(guò)20倍，生物素也可以直接以粉末的形式加入抗體溶液中。將生物素溶解在其合適的溶劑中（請(qǐng)參照所選生物素的說(shuō)明書(shū)，不同的生物素其溶劑不同），濃度為20mg/ml,按照生物素與抗體分子摩爾比1:20的比例加入抗體溶液，室溫反應(yīng)1h。

抗體的FITC標(biāo)記。FITC（異硫氰酸熒光素，F(xiàn)luorescein Isothiocyanate）是一種廣泛應(yīng)用的熒光染料，其核心特性和應(yīng)用如下：分子結(jié)構(gòu)包含熒光素母核和活性異硫氰酸酯基團(tuán)（-N=C=S），分子式為C??H?1NO?S，分子量約389.38 g/mol。生物成像與診斷?免疫熒光染色?：標(biāo)記抗體后定位細(xì)胞或組織中的抗原分布。FITC標(biāo)記抗體。（抗體：FITC）=1mg:150μg的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中，邊加邊輕輕晃動(dòng)使其與抗體混合均勻，避光4℃反應(yīng)8h；

HRP快速標(biāo)記試劑盒使用前準(zhǔn)備。o 調(diào)整抗體濃度至 ?2 mg/mL?（常用范圍2-10 mg/mL）。o 小分子標(biāo)記需確保HRP過(guò)量，標(biāo)記后透析去除未結(jié)合分子。o 抗體溶液中加入1/10體積標(biāo)記緩沖液，混勻。o 加入等質(zhì)量的活化HRP（如1 mg抗體:1 mg HRP），吹打混勻避氣泡1。o 溶解NaIO?（20 mg/mL），與HRP溶液等體積混合（如200 μL HRP + 200 μL NaIO?）。o 標(biāo)記反應(yīng)需嚴(yán)格在說(shuō)明書(shū)指定pH緩沖液（如pH 7.4 PBS）中進(jìn)行。

Frdbio 小鼠抗體純化試劑盒。小鼠抗體純化試劑盒用于純化小鼠血清,腹水和含有鼠源抗體的制品;本試劑盒配備了純化小鼠抗體所必需預(yù)裝柱及核心試劑。本蛋白純化試劑特點(diǎn)：洗脫緩沖液的配制：a步驟配好的10X洗脫液, 加入9倍體積的去離子水稀釋成洗脫緩沖液。4）SDS-PAGE檢測(cè)分析得到的純化樣品（包括流穿組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品,純化樣品根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行透析濃縮等。1）5-10倍柱床體積的洗脫緩沖液繼續(xù)清洗；

生物素標(biāo)記及效率檢測(cè)試劑盒。可標(biāo)記抗體量。本生物素快速標(biāo)記試劑盒提供了生物素快速標(biāo)記所需全部試劑，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗體/多肽或者其他大分子的標(biāo)記。計(jì)算示例：我們將生物素配置成10mM的濃度，用來(lái)標(biāo)記1mL的2mg/mL 的抗體（IgG ，150KD），準(zhǔn)備加入的生物素與抗體的比例為20:1，那么帶入公式計(jì)算。取1mg 待標(biāo)記抗體于超濾管中，并加入相應(yīng)體積的標(biāo)記緩沖液，使抗體的終濃度為 2mg/mL，12,000 x g 離心 10min。

細(xì)胞融合所需試劑：1640不完全培養(yǎng)基MAC0016、PEG融合劑（如PEG1450）MAC0011、HAT完全培養(yǎng)基MAC0013、胎牛血清MAC0010、雙抗（鏈霉素和青霉素）、HAT或HT選擇性培養(yǎng)基等。· 用1640不完全培養(yǎng)基將SP2/0細(xì)胞和免疫鼠脾細(xì)胞重懸，分別計(jì)數(shù)后按一定比例（如脾細(xì)胞/0細(xì)胞=1:3）混合于50ml無(wú)菌離心管中。陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的亞克隆。· 在亞克隆過(guò)程中需使用HT完全培養(yǎng)基等選擇性培養(yǎng)基以促進(jìn)雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。

雜交瘤實(shí)驗(yàn)技術(shù)詳解雜交瘤實(shí)驗(yàn)技術(shù)詳解?雜交瘤技術(shù)，又稱單克隆抗體技術(shù)，是指通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)將B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，形成能在體外長(zhǎng)期存活并分泌免疫蛋白的雜交瘤細(xì)胞。通過(guò)融合，可以得到未融合脾細(xì)胞、未融合骨髓瘤細(xì)胞、脾細(xì)胞-脾細(xì)胞融合體、骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞融合體和脾細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞雜合體（雜交瘤細(xì)胞）等多種細(xì)胞類(lèi)型。獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株后，可以采用體外培養(yǎng)法或腹水制備法大量制備單克隆抗體。

【吹爆】雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)添加因子讓你事半功倍！親愛(ài)的科研達(dá)人們，今天要給你們種草一個(gè)實(shí)驗(yàn)室里的“寶藏”——專為雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的添加因子！【數(shù)據(jù)亮眼】 使用這款因子后，細(xì)胞活性和增殖的數(shù)據(jù)表現(xiàn)讓人眼前一亮，圖表上的數(shù)據(jù)飆升，讓你的研究結(jié)果更加亮眼?！具m用廣泛】 適用于多種雜交瘤細(xì)胞系，無(wú)論是單克隆抗體生產(chǎn)還是其他生物制品研發(fā)，這款因子都是你的得力助手。

1.2 稱取10 mg Sulfo-SMCC(Frdbio)于2ml超純水配成【5mg/ml Sulfo-SMCC溶液】。2.2 稱取20mg多肽溶解于5ml交聯(lián)緩沖液(0.1M PB，0.15M NaCl)中，配成【4mg/ml的多肽溶液】（對(duì)于難溶肽，可用≤30%的DMSO溶解），一般我們只偶聯(lián)5～10mg多肽，等比例縮小體積即可。3．Ellman試劑檢測(cè)多肽-SH狀態(tài)評(píng)估載體與多肽偶聯(lián)效率。2. 將待偶聯(lián)多肽溶解在步驟1）的溶液中，終濃度2mg/ml左右，多肽與載體蛋白摩爾比例20:1～40:1最好。

本試劑盒先將抗體固定在預(yù)處理超順磁性聚合物微球表面，使抗體與其他蛋白分離，再將高活性的生物素標(biāo)記在抗體上，通過(guò)洗脫、中和即可得到高純度的生物素標(biāo)記的抗體。6）將離心管移出磁力架，按照1mg抗體對(duì)應(yīng)400ul抗體洗脫液，吹打磁珠10次，將離心管重新放回磁力架，待磁珠全部被吸附到離心管側(cè)壁，將移液器吸頭插入到離心管底部吸取全部的洗脫標(biāo)記抗體，轉(zhuǎn)移到新的離心管，立即加入100ul抗體穩(wěn)定液，即得到生物素標(biāo)記的抗體。

蛋白抗體標(biāo)記。化學(xué)小分子標(biāo)記物（熒光素標(biāo)記物）的標(biāo)記；目前，我們可以提供的熒光素試劑盒有如下種類(lèi)：Frdbio? 熒光素Cy3, Frdbio? 熒光素Cy5, Frdbio?FITC, Frdbio?熒光素Flour350, Frdbio?熒光素Flour405, Frdbio?熒光素Flour488, Frdbio?熒光素Flour555, Frdbio?熒光素Flour590, Frdbio?熒光素Flour594, Frdbio?熒光素Flour647, Frdbio?熒光素Flour680, Frdbio?熒光素Flour750, Frdbio?熒光素Flour770.

（5）飼養(yǎng)細(xì)胞問(wèn)題，傳統(tǒng)教科書(shū)上融合后鋪板需要加入飼養(yǎng)細(xì)胞，其實(shí)如果血清出色，并不需要添加飼養(yǎng)細(xì)胞，添加飼養(yǎng)細(xì)胞，無(wú)形中還增加了污染的可能；我可能用融合專用血清，15%-20%濃度，一個(gè)老鼠脾臟細(xì)胞與一個(gè)T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶的SP2/0融合，鋪板12-15塊，根本不用加入飼養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)然這也需要看免疫的脾臟的大小，不同的老鼠和不同免疫抗原免疫出來(lái)的脾臟的大小差異還是很大。飼養(yǎng)細(xì)胞的作用，是臨時(shí)提供細(xì)胞因子和伴侶支持；

單抗融合無(wú)憂套裝。本產(chǎn)品為單抗制備融合無(wú)憂套裝，用于細(xì)胞融合及篩選，大大提高融合效率及細(xì)胞陽(yáng)性率，使用者需要具備一定的細(xì)胞操作技能和免疫學(xué)知識(shí)。MAC0016.使用前請(qǐng)查看瓶身確認(rèn)試劑是否在有效期內(nèi)；本套裝應(yīng)按照各組份儲(chǔ)存條件來(lái)儲(chǔ)存，若不按照各儲(chǔ)存條件來(lái)存儲(chǔ)，由此帶來(lái)的試劑損壞及其他問(wèn)題，售后不負(fù)責(zé)處理；本套裝提供的試劑都經(jīng)除菌過(guò)濾，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中自配試劑一定要確保準(zhǔn)確，無(wú)污染，因污染問(wèn)題，售后不負(fù)責(zé)處理；

堿性磷酸酶-抗體快速標(biāo)記試劑盒?！救绻贵w量太少，抗體修飾試劑溶液加入量不少于0.5ul】1）本試劑盒中抗體修飾試劑和活化AP溶液為高活性試劑，請(qǐng)-20℃保存；4）使用本試劑盒標(biāo)記抗體，其抗體特異性要高，純度不低于90%，最好使用單克隆抗體，溶液環(huán)境不含游離氨基，最好為PBS溶液；標(biāo)記前抗體需去除NaN3和BSA，抗體的透析、濃縮和濃度測(cè)定等操作都會(huì)造成抗體量的損失，因此標(biāo)記前準(zhǔn)備抗體時(shí)需根據(jù)具體情況考慮最適的抗體量；

取10ml不完全培養(yǎng)基1640在干凈的滅菌玻璃培養(yǎng)皿里，用10ml注射器取5ml培養(yǎng)基，用一個(gè)滅菌鑷子輕輕提起老鼠的腹膜，將5ml培養(yǎng)基打入老鼠腹部，同時(shí)輕輕按摩老鼠的腹部1分鐘后，將培養(yǎng)基回收，置于50ml無(wú)菌離心管中，再次吸取5ml培養(yǎng)基，可重復(fù)此步驟多次。將經(jīng)過(guò)細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾的液體吸入干凈的50ml無(wú)菌離心管中，若取了腹腔細(xì)胞可與之合并置于50ml無(wú)菌離心管中，加培養(yǎng)基至30ml，離心1500rpm，5min，棄上清。

Frdbio 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。將Annexin V 進(jìn)行熒光素（EGFP、FITC）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。3. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不應(yīng)低于1×105，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。如果是貼壁細(xì)胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)。

蛋白表達(dá)蛋白的重組表達(dá)是指將外源基因克隆在含有特定啟動(dòng)子的表達(dá)載體中，讓其在大腸桿菌中在IPTG的誘導(dǎo)下過(guò)量表達(dá)。此外誘導(dǎo)劑的濃度對(duì)蛋白的表達(dá)狀態(tài)也是有影響的，低濃度誘導(dǎo)劑有利于可溶性蛋白的表達(dá)。在一些DE3宿主菌中通過(guò)調(diào)節(jié)IPTG的濃度可以改變蛋白表達(dá)的水平，一般在進(jìn)行蛋白的大量表達(dá)之前會(huì)進(jìn)行小量的測(cè)試誘導(dǎo)，確定最佳IPTG濃度和最適的的誘導(dǎo)溫度使目的蛋白達(dá)到最佳的活性和溶解性。

單克隆抗體簡(jiǎn)述。其實(shí)問(wèn)題很簡(jiǎn)單，任何事情找不到捷徑的時(shí)候，最笨的方法是最保險(xiǎn)的也是最有效的，我們公司常年做單克隆抗體研發(fā)，每一批血清快用完了的時(shí)候，會(huì)從好多個(gè)廠家那里索取很多個(gè)批次做平行融合實(shí)驗(yàn)測(cè)試，測(cè)試實(shí)驗(yàn)會(huì)用三組不同材料，三組不同人員去進(jìn)行。遇到以上相同問(wèn)題的朋友，不妨試試我們的單克隆抗體融合專用血清。

蛋白大小問(wèn)題：一般小于10kD或者大于100kD蛋白都是難于表達(dá)。有些蛋白的分子量與預(yù)期有偏差，SDS-PAGE電泳是結(jié)合電荷/電場(chǎng)與聚丙烯酰胺凝膠孔徑分析蛋白質(zhì)分子量，如果蛋白質(zhì)本身氨基酸組成不符合均態(tài)分布規(guī)律，會(huì)造成在SDS-PAGE膠中遷移率異常，比如P53蛋白，實(shí)際分子量只有40多kD,其電泳顯示為53kD,后經(jīng)過(guò)分析，其序列內(nèi)部含有大量的Pro，更多的實(shí)例也表明內(nèi)部富含pro的蛋白序列會(huì)造成蛋白在SDS-PAGE電泳中遷移率顯示偏大。

熒光-小動(dòng)物活體成像領(lǐng)域的應(yīng)用小動(dòng)物活體成像領(lǐng)域的應(yīng)用。活體動(dòng)物體內(nèi)成像技術(shù)是指應(yīng)用影像學(xué)方法，對(duì)活體狀態(tài)下的生物過(guò)程進(jìn)行組織、細(xì)胞和分子水平的定性和定量研究的技術(shù)。分為生物發(fā)光成像（以Caliper和Xengon儀器為代表）和熒光成像（以KODAK和CRI儀器為代表）。1. 熒光成像的推薦步驟：如果是骨骼和鼻腔等部位靶點(diǎn)的Cy7標(biāo)記藥物，有客戶反映一周后活體成像系統(tǒng)仍能檢測(cè)到熒光成像。成像時(shí)間和成像持續(xù)時(shí)間與注射試劑有關(guān)。