蟲草菌種制作方法主要包括母種分離、液體菌種培養(yǎng)和接種等步驟，?核心在于無菌操作和精準(zhǔn)的環(huán)境控制?，具體流程因蟲草種類（如冬蟲夏草或北蟲草）而異。??

1??、母種制備

母種是菌種擴(kuò)繁的基礎(chǔ)，常用組織分離法或孢子分離法：

（1) 組織分離法?：取新鮮蟲草的子座或蟲體，表面滅菌后切塊接種至PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL），20℃避光培養(yǎng)10-12天，獲得純化菌株。??

?（2)孢子分離法?：收集成熟子囊孢子，懸吊于PDA培養(yǎng)基上，20℃培養(yǎng)后篩選萌發(fā)孢子，繼代培養(yǎng)純化。??

2、液體菌種

培養(yǎng)液體菌種適用于工廠化生產(chǎn)，需優(yōu)化培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件：

?（1) 培養(yǎng)基配方?（以1000mL計(jì)）：

-1 、冬蟲夏草：葡萄糖20g、蛋白胨4g、酵母粉2g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.5g、維生素B1 10mg。??2??6

-2、北蟲草：玉米粉10g、葡萄糖20g、蛋白胨10g、酵母粉0.5g、硫酸鎂0.05g。??7??8

?2、 培養(yǎng)流程?：

分裝培養(yǎng)基至三角瓶（500mL裝200mL），高壓滅菌（121℃, 30分鐘）。??

接入母種（每瓶5-6塊），22-24℃、140r/min搖床培養(yǎng)4-7天，菌液清亮、菌球密集為合格。??

擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，按10%比例接入二級搖瓶，72小時(shí)培養(yǎng)后稀釋5-8倍用于接種。??

3、接種與質(zhì)量控制

?（1) 接種方法?：液體菌種用噴霧器均勻噴灑于栽培料（如小麥或大米），每盆10-20mL，確保無菌操作。??

?（2)、菌種標(biāo)準(zhǔn)?：優(yōu)質(zhì)菌種需滿足菌絲潔白濃密、無雜菌污染，液體菌種菌球直徑1-2mm、氣味清香。??9??10

?常見問題?：

雜菌污染：滅菌不徹底或操作不當(dāng)導(dǎo)致，需重新滅菌接種。??

菌種退化：避免連續(xù)傳代超5次，保種時(shí)用低營養(yǎng)培養(yǎng)基。??

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