生物素分子量?。?/span>244 Da），含活性羧基（-COOH），可通過化學鍵與目標分子的氨基、巰基等基團共價偶聯(lián)。免疫檢測?ELISA/Western Blot?：生物素化抗體 + SA-HRP，增強檢測靈敏度。流式細胞術?：生物素-熒光素（如SA-FITC）復合物分析細胞表面抗原。核酸分析?原位雜交?：生物素標記DNA/RNA探針定位基因表達。病原體診斷?：如HPV檢測試劑盒中的生物素化探針。蛋白質互作研究?BioID技術?：融合BirA酶的目的蛋白標記鄰近蛋白，通過鏈霉親和素磁釣富集后質譜鑒定等。

一般每個抗體可以標記3-5個生物素，標記時，生物素與抗體的比率受抗體濃度影響，對于10 mg/ml 的抗體溶液來說，生物素應超過抗體12倍（摩爾數(shù)），對于2 mg/ml 的抗體溶液應超過20倍，生物素也可以直接以粉末的形式加入抗體溶液中。待標記的蛋白樣品不得含有疊氮鈉、BSA、甘氨酸、Tris或其他任何有自由氨基的添加物。

生物素標記抗體

1)、抗體的前處理：

a. 選擇適當截留的超濾柱中加入400μl 標記反應溶液（0.1M PBS pH 7.2），加入1mg抗體，混勻。

b. 4℃，6,000rpm，離心2min,棄濾液；于超濾柱中再加入200μl 標記反應溶液，混勻。4℃，6,000rpm，離心2min,

c. 重復步驟b  6到7次。

d. 混勻超濾柱中的殘留的液體，室溫靜置1min；將超濾柱反轉倒置于一新的超濾管中，4℃，1000×g，2min，收集液體。

e. 取50μl PBS于超濾柱中混勻，靜置1min。倒置超濾柱，4℃，6,000rpm，2min。收集液體。

f. 步驟d與步驟e的收集的濾液合并，用標記反應溶液調(diào)節(jié)抗體濃度到2mg/ml， 4℃放置備用。

2)、生物素的標記：

a. 將生物素溶解在其合適的溶劑中（請參照所選生物素的說明書，不同的生物素其溶劑不同），濃度為20mg/ml,按照生物素與抗體分子摩爾比1:20的比例加入抗體溶液，室溫反應1h。

b. 葡聚糖凝膠分離純化/透析袋或者超濾管去除游離生物素及其他試劑。

c. 將抗體保存于合適的抗體保存液

ARL0020SK