【2】HPLC正相色譜柱,清洗,維護(hù)  

[轉(zhuǎn)貼] 正相HPLC色譜柱的清洗、再生和維護(hù)方法

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正相柱一般包括硅膠、CN基、Diol和氨基柱。最好是事先采用預(yù)防性的措施，如樣品過濾、用預(yù)柱和保護(hù)柱的方法，以盡可能的減少色譜柱的污染。下面的方法有助于延長正相色譜柱的使用壽命，運(yùn)用方法中的理念，也可以用來診斷解決色譜柱使用中的疑難問題。

　　清洗步驟

　　1. 每次清洗都用低流速起步，當(dāng)檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。

　　2. 先用10柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。

　　3. 再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強(qiáng)溶劑反沖色譜柱。

　　4. 100%異丙醇的極性和正相洗脫能力足夠把正相柱上的所有殘留物清洗掉。如果異丙醇的清洗還不足以恢復(fù)色譜性能，則說明色譜柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法無法解決這個問題。色譜癥狀和清洗再生過后的色譜性能恢復(fù)情況往往能提供色譜柱真正存在問題的線索。

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　　正相柱除水分

　　諸如保留時間漂移等選擇性改變的一些色譜癥狀，可以歸因于固定相的變化，而填料可能還是完好的。在正相色譜中，固定相的水分含量常常是個影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù)。大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解水分(正己烷20攝氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色譜柱中水分含量隨時間的不同是導(dǎo)致選擇性變化的最普通的一個因素。

兩篇相關(guān)資料，個人感覺不錯：《高效液相色譜方法及應(yīng)用 于世林》       《 HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法》

用含2.5 % 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5 % 冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個柱體積，可以去除色譜柱中水分并恢復(fù)色譜柱原來或所需要的選擇性。

　　考慮到從流動相和色譜柱中完全去除水分非常困難，還有個尚有爭議的簡單方法可以采用。使用水分含量可控的流動相(譬如和水半飽和)以一直保持最初的方法選擇性，而不需要每次進(jìn)行冗長的除水分步驟。不管何種情況，最重要的都是保持水分條件的一致性。 

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