多聚ADP-核糖ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：

制備濃度范圍為5 nM至0.019 nM的聚（ADP-核糖）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋系列通過在分析稀釋劑中稀釋聚（ADP-核糖）標(biāo)準(zhǔn)品（2.5μM）得到的nM。

多聚ADP-核糖ELISA檢測(cè)試劑盒樣品制備：

1、細(xì)胞樣本：抽吸培養(yǎng)基。用含有1X PARP抑制劑（1）的PBS清洗細(xì)胞一次mg/mL 3-AB）。向每個(gè)培養(yǎng)基中添加1 ml含有1X PARP抑制劑（1mg/ml 3-AB）的RIPA緩沖液10厘米培養(yǎng)皿。在冰上孵育10-20分鐘。用電池刮去表面上的電池刮刀轉(zhuǎn)移至離心管，并在4°C下以10000 g離心10分鐘。收集樣品上清液，添加SDS至最終濃度1%，并煮沸（100℃）5分鐘。迅速冷卻煮沸后將試管置于冰上，然后以10000 g離心5分鐘?？蓪?duì)上清液進(jìn)行分析直接地

2、組織樣本：采集后快速冷凍組織（例如，使用液氮）。權(quán)衡冷凍組織，并每天添加5-10μL含有1X PARP抑制劑（1mg/mL 3-AB）的RIPA緩沖液毫克的組織。對(duì)組織樣品進(jìn)行超聲波處理或均質(zhì)處理（將其置于冰上），并以10000 g離心在4°C下持續(xù)10分鐘。收集上清液，添加SDS至最終濃度1%并煮沸（100°C）持續(xù)5分鐘。煮沸后在冰上快速冷卻試管，然后以10000 g離心5分鐘可直接對(duì)上清液進(jìn)行分析。

注：3-氨基苯甲酰胺（3-AB）是PARP的抑制劑，可避免人工合成樣品裂解過程中的PAR。

多聚ADP-核糖ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方案：

1、使用前，準(zhǔn)備并充分混合所有試劑。每個(gè)聚（ADP核糖）樣品包括未知和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)一式三份進(jìn)行分析。

2.將100μL未知樣品或聚（ADP核糖）標(biāo)準(zhǔn)品添加到新鮮樣品的孔中制備聚ADP核糖抗體涂層板。在室溫下，在培養(yǎng)皿上培養(yǎng)1小時(shí)軌道振動(dòng)篩。

3.用250μL 1X清洗緩沖液清洗微孔板條3次，每孔徹底抽吸在每次清洗之間。最后一次清洗后，清空微孔，并將微孔條輕敲在吸水墊或吸水墊上用紙巾去除多余的1X洗滌緩沖液。

4.向所有孔中添加100μL稀釋的抗聚（ADP核糖）檢測(cè)抗體并孵育在室溫下，在軌道振動(dòng)篩上振動(dòng)1小時(shí)。根據(jù)步驟清洗帶槽3次上文第3段。

5.向所有孔中添加100μL稀釋的二級(jí)抗體HRP結(jié)合物，并培養(yǎng)1小時(shí)在室溫下，在軌道振動(dòng)篩上。在試驗(yàn)過程中，將基底溶液加熱至室溫這是孵化。

6.按照上述步驟3清洗微孔板3次。立即進(jìn)行下一步。

7.加上100mL的基底溶液對(duì)每個(gè)井，包括空白威爾斯。在室內(nèi)孵化軌道振動(dòng)篩上的溫度。實(shí)際孵化時(shí)間可能在2-30分鐘之間。

注意：小心觀察表盤；如果顏色變化迅速，可能需要盡快停止反應(yīng)防止飽和。標(biāo)準(zhǔn)曲線上的藍(lán)色漸變?cè)诶L制前應(yīng)清晰可見添加停止解決方案。

8、在每孔中加入100μl的停止溶液，包括空白，停止酶反應(yīng)。威爾斯。應(yīng)立即讀取結(jié)果（顏色會(huì)隨時(shí)間褪色）。

9.使用450 nm作為主波，在分光光度計(jì)上讀取每個(gè)微孔的吸光度長(zhǎng)

以上，就是多聚ADP-核糖ELISA檢測(cè)試劑盒樣品制備&檢測(cè)方案。