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Frdbio? Strep-tag II標(biāo)簽蛋白純化試劑盒用于純化各種表達(dá)系統(tǒng)中含有Strep-tagII或者TwinStrep-tagII標(biāo)簽的重組蛋白，包括大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)等等;本試劑盒配備了純化蛋白所必需預(yù)裝柱及核心試劑。 本試劑盒中預(yù)裝柱的填料為Streptactin Beads 4FF。偶聯(lián)到填料的蛋白配基為改良Streptactin蛋白，主要優(yōu)勢(shì)如下： 本蛋白純化試劑特點(diǎn)： ? Strep-tagII/TwinStrep-tagII這兩個(gè)標(biāo)簽標(biāo)小，并且對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)沒(méi)有影響； ? Strep-tagII/TwinStrep-tagII標(biāo)簽與Streptactin親和力高，非6*His、GST之輩可比； ? Streptactin Beads這個(gè)純化可以耐受變性劑，在高濃度尿素和鹽酸胍里仍然可以輕松掛柱，純化包涵體不是障礙； ? 生物素可以輕松洗脫，不需要昂貴的脫硫生物素； ? 洗脫條件溫和，不會(huì)對(duì)蛋白造成造成損傷； ? 填料再生簡(jiǎn)單，反復(fù)使用，實(shí)驗(yàn)室測(cè)試表明再生15次后，Streptactin Beads填料效率沒(méi)有明顯降低。 產(chǎn)品主要參數(shù)： 基質(zhì)：交聯(lián)度4%瓊脂糖凝膠 配體：改良Streptactin蛋白 載量：4mg Twin Strep-tagII蛋白/ml基質(zhì) 介質(zhì)微球粒徑：45-165um 最大流速：300cm/h
試劑盒已經(jīng)提供材料：
其他需要自備試劑材料： 2 待純化蛋白樣品； 2 移液器及吸頭； 2 去離子水； 2 0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾。 產(chǎn)品儲(chǔ)存 儲(chǔ)存緩沖液：含20%乙醇的1×PBS 儲(chǔ)存溫度：2-8℃ 產(chǎn)品使用操作： 1.使用前準(zhǔn)備 1）緩沖液的準(zhǔn)備 基礎(chǔ)緩沖液: 按照實(shí)驗(yàn)所用量，取試劑盒中濃縮基礎(chǔ)緩沖液，加入9倍體積的去離子水稀釋成基礎(chǔ)緩沖液； 洗脫液: 按照實(shí)驗(yàn)所需用量，取試劑盒中濃縮洗脫液，加入9倍體積的去離子水稀釋成洗脫液； 再生液: 按照實(shí)驗(yàn)所需用量，取試劑盒中濃縮再生液，加入9倍體積的去離子水稀釋成再生液； 緩沖液在使用之前建議用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾。 2）樣品準(zhǔn)備樣品 使用上述基礎(chǔ)緩沖液制備上樣樣品（細(xì)胞/細(xì)菌裂解液），樣品在上樣前用0.22μm或0.45μm濾膜過(guò)濾，防止堵塞柱子。 3）Frdbio? Streptactin Beads 4FF純化柱的準(zhǔn)備 取出試劑盒中預(yù)裝柱平衡到室溫，打開(kāi)純化柱底部開(kāi)關(guān)，用3-5個(gè)體積去離子水沖洗柱床，隨后用5-10個(gè)柱床體積基礎(chǔ)緩沖液平衡柱子，確保柱床無(wú)氣泡。 2.從樣品中純化目標(biāo)蛋白 1）使用蠕動(dòng)泵上樣或者直接上樣（重力法）； 上樣量不要超過(guò)柱子的結(jié)合能力。 2）上樣完畢后，用基礎(chǔ)緩沖液洗掉未結(jié)合的雜蛋白，直到到紫外吸收監(jiān)測(cè)儀達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線（一般需要10-15個(gè)柱體積）； 3）使用洗脫液洗脫目的蛋白，順次接收并做好標(biāo)記，直到到紫外吸收監(jiān)測(cè)儀達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線（一般需要5-10個(gè)柱體積）； 4）SDS-PAGE檢測(cè)分析得到的純化樣品（包括流穿組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品。 3.純化柱清洗、再生與保存。 1）5-10倍柱床體積的洗脫緩沖液繼續(xù)清洗； 2）3倍柱床體積的去離子水清洗； 3）5-10倍柱床體積的0.1M NaOH溶液； 4）3倍柱床體積去離子水清洗后于含20%乙醇的PBS 2-8℃保存。 |
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