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作者:李雪 李琦 單位:中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院檢驗(yàn)科 患者,男,76歲,1月21日腦病科就診,臨床診斷急性腦血管病, 患者于1月19日和20日新冠核酸檢測結(jié)果均為陰性,21日進(jìn)行新冠抗體檢測(儀器A,直接化學(xué)發(fā)光法)時(shí),發(fā)現(xiàn)結(jié)果顯示IgM抗體為1.864 S/CO(參考區(qū)間<1.0 S/CO),結(jié)果上報(bào)給科主任的同時(shí),采用儀器B(磁微?;瘜W(xué)發(fā)光法)和膠體金的方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行復(fù)查,復(fù)查結(jié)果顯示:儀器B均為陰性(圖2),膠體金為IgG疑似陽性(圖3)。 那么,該患者為什么會(huì)出現(xiàn)2019-nCoV特異性IgM和IgG抗體結(jié)果不一致的情況呢? 國家衛(wèi)健委頒布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第八版)》中明確表示:目前新冠抗體主要采用免疫學(xué)方法檢測,因此多種因素會(huì)造成對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾,抗體檢測可能會(huì)出現(xiàn)假陽性。一般不單獨(dú)以血清學(xué)檢測作為診斷依據(jù),需結(jié)合流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)和基礎(chǔ)疾病等情況進(jìn)行綜合判斷。 1、內(nèi)源性 內(nèi)源性干擾物質(zhì)一般包括類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、補(bǔ)體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體等。在日常的臨床血清(漿)標(biāo)本中,有相當(dāng)比例的標(biāo)本不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì),從而可能導(dǎo)致測定結(jié)果的假陽性。 (1)類風(fēng)濕因子RF 在類風(fēng)濕患者、其他疾病以及正常人血清中,常含有較高或不同濃度的RF,其通常為IgM型,亦有IgG和IgA型。RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn),因此在免疫測定中,其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的標(biāo)記的特異抗體IgG結(jié)合,從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。尤其是在捕獲法IgM型特異抗體的測定中表現(xiàn)最為明顯,因?yàn)榇藭r(shí)固相包被的抗體為抗人μ鏈抗體,IgM型RF的存在可使其大量結(jié)合于固相。 (2)嗜異性抗體 人類血清中可能會(huì)含有抗嚙齒類動(dòng)物(如鼠、馬、羊等)的抗體,即天然嗜異性抗體。有研究表明,天然的嗜異性抗體(IgG)可分為兩類,一類(85%的假陽性由其引起)可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域,但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類(15%的假陽性由其引起)可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位,但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過交聯(lián)固相和標(biāo)記的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。 (3)補(bǔ)體 在固相免疫測定中,來自哺乳動(dòng)物的固相特異抗體和標(biāo)記二抗均可以激活人補(bǔ)體系統(tǒng)。因?yàn)槠湓诠滔辔郊敖Y(jié)合過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),F(xiàn)c段的補(bǔ)體C1q結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,這樣C1q就成為一個(gè)中介物將二者交聯(lián)起來,從而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。 (4)因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體 在臨床上,有可能使用鼠源性單克隆抗體進(jìn)行靶向治療,及使用放射性核素標(biāo)記鼠源性單克隆抗體進(jìn)行影像診斷等,均有可能使相應(yīng)患者體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體。這種抗鼠抗體對(duì)使用鼠源性單克隆抗體的免疫測定,可產(chǎn)生假陽性結(jié)果。 (5)溶菌酶 溶菌酶可與等電點(diǎn)較低的蛋白有強(qiáng)的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點(diǎn)約為5,因此在免疫測定中,溶菌酶可在包被的IgG和標(biāo)記的IgG間形成橋接,從而導(dǎo)致假陽性。 2、外源性 外源性干擾物質(zhì)包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長和標(biāo)本凝固不全等。 (1)標(biāo)本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白的血紅素基團(tuán)有類似過氧化物的活性,因此在以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記酶的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其在溫育過程中會(huì)吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色或發(fā)光,導(dǎo)致假陽性。 (2)標(biāo)本貯存時(shí)間過長 標(biāo)本在2-8℃下保存時(shí)間過長,IgG可聚合成多聚體,在間接法免疫測定中會(huì)導(dǎo)致本底過深,甚至造成假陽性。 (3)標(biāo)本凝固不全 血液采集后,如收集管中無促凝劑和抗凝劑,則血液通常在半小時(shí)后開始凝固,18-24h完全凝固。日常檢驗(yàn)中,有可能在血液還未開始凝固時(shí)即離心分離血清,此時(shí)因血液沒有完全凝固,離出的“血清”并非為完全的血清,其中仍殘留部分纖維蛋白原。如將其加入微孔中,在ELISA測定過程中仍可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果。 抗體檢測試劑說明書預(yù)期用途中明確說明:抗體檢測試劑僅用作對(duì)新冠病毒核酸檢測陰性疑似病例的補(bǔ)充檢測,或在疑似病例診斷中與核酸檢測協(xié)同使用,不作為新冠病毒感染者確診和排除的依據(jù),也不適用于一般人群的篩查。 通過該病例我們意識(shí)到,遇到新冠抗體陽性時(shí),應(yīng)關(guān)注患者新冠核酸檢測結(jié)果、臨床癥狀體征及其流行病學(xué)史,使用其他檢測方法進(jìn)行復(fù)查,排除可能干擾抗體檢測的影響因素,并及時(shí)與臨床溝通,必要時(shí)可以通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測新冠核酸、IgM和IgG抗體水平來判斷有無感染的發(fā)生,確保報(bào)告的準(zhǔn)確與及時(shí),為新冠的臨床診治提供支持。 來源:檢驗(yàn)科 |
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