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1.表達(dá)宿主菌的選擇 大腸桿菌常用的表達(dá)宿主菌有E.ColiBL21(DE3),E.ColiRossatta(DE3),E.ColiBL21(DE3)Condon Plus。針對(duì)特殊的目標(biāo)蛋白其所需要的宿主菌也不相同，每種宿主菌的基本特征可在本網(wǎng)站查詢，福因德生物可提供表中所列菌種的感受態(tài)細(xì)胞，如需更多信息可聯(lián)系福因德技術(shù)部門。 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品特點(diǎn)與應(yīng)用 | MCC0010 | E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl×10 | 實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率高，可用于藍(lán)白斑篩選。 | MCC0010S | E.coli DH5α超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl×10 | 主要用于文庫的構(gòu)建；超高的轉(zhuǎn)化效率，可達(dá)107cfu/μg。 | MCC0020 | E.coli BL21(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl×10 | λDE3溶原菌，帶有T7 RNA聚合酶，可用于表達(dá)T7啟動(dòng)子控制的目的基因，也可以表達(dá)大腸桿菌啟動(dòng)子lac、tac、trc及trp控制的基因。 | MCC0030 | E.coli BL21(DE3)plysS感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl×10 | 除了具有BL21(DE3)優(yōu)勢(shì)外，PlysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾目的蛋白的表達(dá),所以適合表達(dá)毒性蛋白。 | MCC0050 | E.coli Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl×10 | 補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子（AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。 | MCC0040 | E.coli BL21(DE3) Condon Plus感受態(tài)細(xì)胞 | 100μl×10 | 用于原核表達(dá),缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子(AGA，AUA，CCC，CUA)；提高富含AT-或 GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平 |
2．優(yōu)化表達(dá)條件
表達(dá)條件(包括IPTG濃度、誘導(dǎo)溫度和和誘導(dǎo)時(shí)間等)的優(yōu)化（可參照以下的正交圖設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)），主要是為了提高蛋白產(chǎn)量/提高可溶性蛋白表達(dá)比例；選用不同誘導(dǎo)時(shí)長(zhǎng)主要是為了選擇最佳收獲時(shí)間（時(shí)間短了，蛋白產(chǎn)量不夠；時(shí)間長(zhǎng)了，大量蛋白降解）；溫度誘導(dǎo)主要是為了得到可溶性表達(dá)的蛋白，很多的蛋白即使低溫誘導(dǎo)也不能實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)，一定要實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)盡可能選擇促溶標(biāo)簽/調(diào)整IPTG濃度，使翻譯速度放緩有充分時(shí)間折疊。福因德生物技術(shù)團(tuán)隊(duì)研發(fā)的自誘導(dǎo)培養(yǎng)基（Frdbio T7表達(dá)自誘導(dǎo)培養(yǎng)基即用型，PER0011）就是充分利用此原理，對(duì)表達(dá)在包涵體狀態(tài)的蛋白優(yōu)化為上清可溶表達(dá)狀態(tài)的成功率高達(dá)60%?？扇苄员磉_(dá)的策略在“蛋白可溶性表達(dá)的解決方案”中有詳細(xì)的闡述。  
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