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RNA的轉錄與RNA聚合酶

 lcy1971 2020-03-14

大多數(shù)生物將遺傳信息儲存在DNA中,因為DNA是一種高保真的材料。真核生物還把DNA與組蛋白結合起來,形成染色質結構,保存在細胞核中。同時,還通過復雜的修復機制保證其忠實性。

當DNA中的某個遺傳信息需要表達時,第一步是將其轉移到RNA分子上,即轉錄(transcription)。所以多數(shù)RNA是DNA中部分信息的臨時載體,成本低,壽命短,數(shù)量多。

RNA的結構與功能多樣。mRNA是信息分子,用于把蛋白質的一級結構信息傳遞到細胞質中;非編碼RNA一般是功能分子,可以形成特定的結構,以實現(xiàn)某種功能,比如基因表達調控等。

  非編碼RNA的分類。J Integr Bioinform. 2019

對于不同種類的RNA,真核生物采用不同的RNA聚合酶來合成。RNA聚合酶I(RNA pol I,RNAP I或RNA pol A)負責轉錄rRNA,但不包括5 S rRNA;RNAP II負責mRNA、大多數(shù)的lncRNA和snRNA,以及部分microRNA;RNAP III負責分子較小的RNA,如tRNA、5 S rRNA、U6 snRNA以及部分microRNA。

RNA聚合酶與轉錄機制的研究也是生命科學中的重要內容。2006年,羅杰·科恩伯格(Roger D. Kornberg,亞瑟·科恩伯格長子)“因其對真核轉錄的分子基礎的研究”而獲得諾貝爾化學獎。

羅杰·科恩伯格。引自諾貝爾基金會

羅杰一直致力于結構生物學研究,其獲獎的主要原因是解析了酵母RNAP II的晶體結構。但他的貢獻不僅于此,他在70年代即推斷出核小體的基本結構,90年代又通過實驗將其證實。這也為轉錄機制的研究打下了基礎。同時,也說明結構生物學研究并非僅僅依靠儀器,敏銳的頭腦也是必不可少的。

這三種RNA聚合酶最初是根據(jù)它們對一種抑制劑(α-鵝膏蕈堿)的敏感性來區(qū)分的,RNAP I不受抑制;RNAP II對其敏感,低劑量即產生抑制;RNAP III在高劑量時才被抑制。

鵝膏蕈堿與RNA聚合酶。引自PDB-101

鵝膏蕈堿結合在RNA聚合酶的背面,遠離活性位點及DNA和RNA的結合位點。所以它并不阻止磷酸二酯鍵的形成,而是阻止酶在DNA模板上的移位,從而阻斷RNA的延伸。它結合在酶的兩個亞基之間,通過阻止酶的構象變化抑制其移位。

鵝膏蕈堿抑制mRNA合成,因而阻斷蛋白質合成,是劇毒物質。產生鵝膏蕈堿(amanitin)的毒蘑菇是鬼筆鵝膏(Amanita phalloides),英文常稱為death cap,誤食少許即可導致肝細胞壞死等癥狀,最終昏迷死亡。它還產生另一種毒素鬼筆環(huán)肽(phalloidin),能與微絲結合,常用于細胞骨架染色。

  鬼筆鵝膏。引自百度百科

原核生物總是比真核簡單,其RNA聚合酶只有一種,但具有復雜的多亞基結構。大腸桿菌的全酶包括6個亞基(α2ββ’ωσ),分子量高達450 Kd。其中σ亞基稱為起始因子,可使RNA聚合酶穩(wěn)定地結合到啟動子上。其余部分稱為核心酶,負責根據(jù)DNA模板合成RNA。

σ亞基在不同菌種間變動較大,而核心酶比較恒定。細菌表達多種不同形式的σ因子,它們能夠響應各種信號和環(huán)境條件來識別并結合不同的啟動子序列。已經發(fā)現(xiàn)大腸桿菌有7種σ因子,其中σ70負責轉錄管家基因,識別啟動子共有序列;σ32識別熱休克基因,σ60在氮饑餓時起作用。σ通過在DNA上移動尋找啟動子,不需DNA解鏈。

細菌RNAP核心酶的組裝。EcoSal Plus. 2018

α亞基主要負責RNAP的組裝,β和β'亞基占核心酶總質量的80%,負責結合模板并催化形成磷酸二酯鍵。ω亞基可能是用于RNAP折疊的分子伴侶。

噬菌體的RNA聚合酶是單鏈蛋白,功能也簡單,與其簡單的基因組相適應。另外,線粒體和葉綠體也只有一種RNA聚合酶。

T7噬菌體的RNA聚合酶。引自PDB-101

與DNA聚合酶相比,RNA聚合酶也需要模板,合成方向也是5’-3’,但其底物是4種NTP,而且不需要引物。RNA聚合酶的合成速度要比DNA聚合酶慢得多,約為50-100堿基/秒,而DNA聚合酶約為1000堿基/秒。

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