腫瘤細(xì)胞有良性和惡性之分；癌細(xì)胞則是惡性，是會(huì)擴(kuò)散的細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞包含癌細(xì)胞，它們共同特點(diǎn)是從基因水平上失控的、能無(wú)限增殖的細(xì)胞。癌細(xì)胞有三個(gè)顯著的基本特征即：不死性、遷移性和失去接觸抑制。

常規(guī)較容易成瘤的細(xì)胞

Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(大細(xì)胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（人黑色素瘤細(xì)胞），SGC7901 人胃腫瘤細(xì)胞 ， CNE（鼻咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（結(jié)腸癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌 ， CT26 （小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 ），U87 （人膠質(zhì)瘤細(xì)胞） ， MGC-803（人胃癌細(xì)胞） ，PC-3 （人前列腺癌細(xì)胞）。

裸鼠的選擇

實(shí)驗(yàn)室常用的是BALB/c-nu裸小鼠 ,隨著裸小鼠年齡增長(zhǎng)或有關(guān)因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞會(huì)增加，故接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4--6周齡的裸鼠。

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)技巧

1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。

3、用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1-0.2ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml，如若有條件的實(shí)驗(yàn)室，也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成，基質(zhì)膠與PBS或無(wú)血清的比列為1:1。

4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成（如果接種量大，可以分批接種），途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。

5、選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重16-18g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部。

6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率，并且導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過(guò)大。

7、接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，針頭在皮下左右滑動(dòng)幾次，以便細(xì)胞接種成團(tuán)，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。

8、如何保定裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

9、接種后1-2周左右可以見(jiàn)到皮下開(kāi)始出現(xiàn)腫塊。

10、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過(guò)大，一般不要超過(guò)2000mm3。

11、腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長(zhǎng)軸，b為短軸)。

12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

常見(jiàn)問(wèn)題及解答

1、這個(gè)實(shí)驗(yàn)為什么用裸鼠而不用普通的老鼠或者小白鼠？

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)用的裸鼠，最大的特點(diǎn)是沒(méi)有胸腺等免疫器官，它的免疫力幾乎為零，對(duì)腫瘤細(xì)胞沒(méi)有免疫作用，易于成瘤。

2、瘤塊長(zhǎng)起來(lái)又消失？

腫瘤塊先縮小，后變大很常見(jiàn)，很可能是炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收，繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過(guò)幾周還能長(zhǎng)出來(lái)，長(zhǎng)不起來(lái)建議換鼠。

3、是否可以在一只小鼠進(jìn)行多個(gè)點(diǎn)接種？

不可以，一只老鼠就只能接種一個(gè)點(diǎn)，因?yàn)橐粋€(gè)老鼠身上有多個(gè)腫瘤塊的情況下，可能會(huì)相互影響。

4、腫瘤長(zhǎng)不出來(lái)是怎么回事？

第一：腫瘤生長(zhǎng)周期很慢，一周開(kāi)始生長(zhǎng)腫塊，大約需要1~2個(gè)月才能長(zhǎng)成腫瘤；

第二：可能是細(xì)胞狀態(tài)差，活力不好，或是腫瘤細(xì)胞不易成瘤，需加入基質(zhì)膠輔助或增大接種量或更換細(xì)胞系；

第三：一方面可能是小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠）。

5、腫瘤體積相差很大，大小不一？

首先，并不是所有的腫瘤都能夠長(zhǎng)得均一形態(tài)。其次，這可能跟小鼠周齡及接種細(xì)胞量不一致導(dǎo)致，建議重新接種。

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