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人造血干細胞(HSC)的分離、擴增和分析

 AlsanY2020 2019-07-18

造血干細胞HSC

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什么是造血干細胞?

造血干細胞(hematopoietic stem cell, HSC)是一類具有自我更新(self-renewal)和多向分化潛能(multi-lineage differentiation)的造血組織干細胞,通過定向分化產(chǎn)生各系造血祖細胞(如淋系祖細胞和髓系祖細胞等),再大量增殖分化為各種成熟的功能性血細胞,從而維持整個機體的穩(wěn)態(tài)造血。

血細胞生成的最初跡象發(fā)生在卵黃袋內(nèi)和主動脈 - 性腺 - 中腎區(qū)血液島的胚胎發(fā)育過程中。這些早期HSC在后期發(fā)育階段遷移到胎盤和胎肝中,胎盤和胎肝作為產(chǎn)前造血的主要區(qū)室。出生前不久,HSCs遷移到骨髓,在整個生命過程中發(fā)生成人造血。

HSC用作模型以了解造血調(diào)節(jié)并闡明驅(qū)動干細胞自我更新或針對特定血細胞類型的定向分化的機制。臨床上,HSC或富含HSC的部分用于治療血液相關(guān)疾病,如白血病,鐮狀細胞病或免疫缺陷嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)。

Fig.1 HSC分化圖

除骨髓外,還可以從血源中發(fā)現(xiàn)和分離HSC,例如:單采血液或臍帶血。 根據(jù)來源,HSC含量在0.1到2.5%之間變化

Fig.2 HSC的來源、分布及表面標(biāo)志物

使異種移植模型對HSC群體的植入分析顯示,遷移到受體骨髓中的大多數(shù)細胞表達CD34, CD38無表達或表達水平低,同時表達CD59,CD90和CD117。 雖然這些細胞顯示出高克隆性和植入潛力,但也僅代表CD34 +細胞群的一小部分。

Fig.3 HSC分化不同時期的表面標(biāo)志物表達

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HSC的分離、擴增和分析

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結(jié)果與分析

1. 磁珠分選得到CD34

2. CD34的培養(yǎng)及擴增

分離的CD34 +在指定的培養(yǎng)基中加上StemMACS HSC Expansion Cocktail。 7天后,分析細胞的CFU潛力。 在StemMACS HSC Expansion Media XF中培養(yǎng)的細胞保持廣泛的造血分化潛能,產(chǎn)生所有主要的CFU類型,包括原始CFU-GEMM。

3.流式分析CD34

如圖所示,在StemMACS中擴增的HSC保持早期的特征性表面表型,造血祖細胞通常表現(xiàn)出較高比例的表型原始細胞。

臍帶血CD34分離后,培養(yǎng)7天的CFU及BFU值

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