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匯總丨HIV診斷標志物

 生物_醫(yī)藥_科研 2019-07-10

來源:石頭道科普


檢測HIV對于篩查,確認和監(jiān)測感染至關重要。有不同類型的診斷工具可用于檢測HIV特異性抗體,病毒抗原或核酸。檢測HIV特異性IgG和IgM抗體的第三代酶免疫檢測,檢測抗HIV抗體和HIV p24抗原的第四代酶免疫檢測以及基于核酸的HIV RNA檢測是目前最常用的診斷方法;對于HIV感染患者,HIV 病毒載量檢測和CD4+細胞計數等是最常用的監(jiān)控方法;HIV基因分型檢測用于檢測 HIV 基因組突變,其對研究和改善HIV病毒的藥物抗性非常有用;干血斑測試對于幼兒和偏遠地區(qū)HIV感染疫情的掌握有著獨特的優(yōu)勢;一些常用的免疫因子,感染指標,血栓標志物對于HIV感染后期患者監(jiān)控具有一定指導意義。生物標志物的發(fā)展的利用對于病情的篩查、診斷、監(jiān)控和治療具有指明燈似的作用,對于控制HIV感染和AIDS的治療起到了關鍵性作用。

目前常用的HIV感染指標

1                    

血清學檢測 

HIV-1/2抗體

應用:HIV感染篩選和HIV感染確認。

篩選測試方法:酶聯免疫吸附測試、化學發(fā)光、免疫熒光、免疫層析試紙條、免疫滲濾法等測試方法。

確認測試方法:免疫印跡、條帶/線性免疫實驗(RIBA/LIA)、間接免疫熒光(IFA)和快速確認等方法。

HIV-1/2抗體是應用最多,且效果最好的感染篩選指標。相比于HIV抗原p24,盡管其窗口期更長,但不存在后期衰減。相比于HIV RNA,其成本更低,方法更多,更適合普及HIV感染篩選。

HIV抗原p24

應用:HIV感染篩選

測試方法:酶聯免疫吸附測試、化學發(fā)光、免疫熒光、免疫層析試紙條、免疫滲濾法等測試方法。

HIV抗原p24無法單獨應用于HIV感染篩選,但可結合HIV-1/2抗體進行早期感染篩選。其窗口期更短,是目前四代HIV試紙條的基礎。

2                    

病毒學檢測 

HIV病毒分離

應用:HIV感染確認。

測試方法:外周血單核細胞(PBMC)共培養(yǎng)法。

陽性判定:培養(yǎng)上清液p24抗原或逆轉錄酶連續(xù)2次呈現陽性反應、并有p24抗原含量/逆轉錄酶活性升高,或同時出現HIV特異性細胞病變,并經鑒定為HIV基因序列,判為HIV-1分離陽性。

HIV病毒分離陽性是最直接的HIV感染確認方法。但該法檢測技術要求較高,較難普及。同時分離陰性并不能排除HIV感染。

HIV核酸檢測

應用:HIV感染篩查、HIV感染確認、嬰兒HIV感染篩查、抗逆轉錄病毒治療監(jiān)控等。

HIV定性檢測:實時定量PCR。

HIV定量檢測:靶核酸擴增和信號放大。

定量結果判定:新行標規(guī)定,當檢測值>5000 cps/mL報告陽性檢測值;檢測值<5000cps/mL,需要再次采樣檢測,以確認檢測值。最終結果需要結合臨床及流行病史、CD4+淋巴細胞檢測或者HIV-1抗體檢測結果進行綜合判斷。

HIV核酸檢測的窗口期更短,且是抗逆轉錄病毒治療效果監(jiān)控推薦的指標之一。盡管行標把核酸診斷納入全民篩查方法,但較HIV-1/2抗體和HIV抗原p24,核酸檢測技術難度和成本都也更高。HIV核酸檢測是嬰兒HIV感染最好的篩查指標。

3                    

細胞免疫學檢測 

CD4+淋巴細胞檢測

應用:HIV感染檢測、AIDS分期、抗逆轉錄病毒治療監(jiān)控等。

CD4+淋巴細胞計數:用于成人及5歲以上兒童和青少年。當計數結果≥500/mm3,則無缺陷。350-499/mm3,輕度缺陷。200-349/mm3,中度缺陷。<200/mm3,重度免疫缺陷。

CD4+淋巴細胞百分比:用于5歲以下兒童。具體判定標準如下。

檢測技術:流式細胞儀或顯微鏡手動計數。

CD4+淋巴細胞檢測是HIV感染和AIDS分期的判定標準。無法單獨作為篩查的診斷標志物。

匯總表格如下

     其它標志物:

應用于HIV感染監(jiān)控

1                    

基因分型檢測 

研究該技術的企業(yè)有雅培和西門子?;蚍中拖到y(tǒng)適用于檢測 HIV 基因組突變(這些突變賦予其對特定類型抗逆轉錄病毒藥物的抗性),從而作為監(jiān)測和治療 HIV 感染的輔助手段。本質上這是一個技術集成系統(tǒng),包括樣品準備系統(tǒng),反轉錄PCR系統(tǒng),測序系統(tǒng),毛細管電泳系統(tǒng)和報告系統(tǒng)。

2                    

干血斑測試 

干血斑(Dry Blood Spots, DBS)目前用在新生兒HIV早期感染診斷與偏遠落后地區(qū)HIV流行的監(jiān)控。由于采血量少(50-80μL),采集制備成本低,制作簡單,適合運輸等特點,該方法在一些特殊場合有他的應用價值。

3                    

免疫類標志物 

這些免疫因子盡管不屬于HIV感染的特異性標志物,但可溶性白細胞介素-2受體,白細胞介素-6,血清IgA和血清細胞因子等的升高意味著HIV感染者的患病率會升高。

4                    

其它標志物 

HIV感染后期與慢性炎癥相關的許多生物標志物也會升高,這些疾病包括心血管疾病,多種形式的癌癥,肝病,腎病,神經認知衰退和骨質疏松癥等。白細胞介素-6,C-反應蛋白,D-二聚體這些都會在這個過程中出現異常。白細胞介素-6是一種細胞因子,目前也用作感染的生物標志物。C-反應蛋白是目前最常用的感染生物標志物之一。D-二聚體的升高證明了凝血酶正在生成,是血栓診斷常用的生物標志物。目前大量的研究證明,HIV感染會增加靜脈血栓形成的風險。

結語

HIV相關的推送基本到此結束了??偨Y起來介紹了HIV及HIV感染的情況HIV檢測國內企業(yè)技術分析和試劑盒批準情況,HIV檢測國外企業(yè)技術分析和試劑盒批準情況微流控HIV檢測,Alere與Cepheid HIV檢測芯片設計和原理對比以及HIV診斷標志物。具體可在歷史消息中查看。在這個過程中,認識了很多新的朋友,也學習了很多新知識。非常感謝您們的支持和意見。接下來一段時間,我將圍繞著HBV和HCV的相關內容推送一系列文章,希望在檢索和整理的過程中,能有所新發(fā)現。


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