跑過瓊脂糖凝膠電泳的小伙伴，是不是經(jīng)常遇到過電泳拖尾的現(xiàn)象??？相信不少人點頭如搗蒜了。提個質(zhì)粒拖尾，提個DNA拖尾，連PCR也拖尾，拖尾什么的最常見了。驗證也就算了，關(guān)鍵是圖片拍出來不好看了，發(fā)文章什么的太影響檔次了。下面我就跟據(jù)自己的經(jīng)驗跟大家講講瓊脂糖凝膠電泳為什么會拖尾，有不足的希望大家多多評論補足?。ㄈ诵斜赜形?guī)熉铮。?a >

那瓊脂糖凝膠電泳為什么會拖尾呢？

1.    PCR產(chǎn)物出現(xiàn)拖尾的因素有很多，總結(jié)為一條，就是非特異性擴增過多。原因可能是：
（1）    模板不純：純化模板
（2）    Buffer不合適：更換Buffer
（3）    退火溫度偏低：適當(dāng)提高退火溫度
（4）    酶量過多：適量用酶，或調(diào)換另一種酶
（5）    dNTP、Mg2+濃度偏高：適當(dāng)降低dNTP和鎂離子的濃度
（6）    循環(huán)次數(shù)過多：減少循環(huán)次數(shù)
（7）    模板量少或引物量過多：增加模板量，減少引物的用量

2.    提質(zhì)粒的時候經(jīng)常有這種個現(xiàn)象，有可能是樣品濃度過高了。這種情況簡單，稀釋一下就行了。

3.    提基因組DNA的時候也常出現(xiàn)拖尾，最可能的就是提的DNA中摻雜有蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)會拽DNA的泳動。所以一定要注意提取基因的操作，減少蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的出現(xiàn)。

4.    樣品破碎或是被降解

5.    存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，經(jīng)過純化，RNAse處理，就沒有了

6.    電泳體系的問題：觀察你的marker是否也存在拖尾現(xiàn)象，作為對照
（1）電泳緩沖液TAE或者TBE的污染：。建議更換緩沖液。
（2）上樣時樣品漂了，建議增加上樣緩沖液的用量，以及小心加樣。
（3）電壓太高：適當(dāng)降低電壓
（4）根據(jù)核酸片斷大小，適當(dāng)把加大凝膠濃度。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。分離小于0.5kb 的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%, 分離大于10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%, DNA片段大小間于兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。