小編有話說(shuō)：
【論文速遞】是我們新開的欄目，旨在把使用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)軟件發(fā)表的最新論文呈現(xiàn)在大家面前，供老師同學(xué)們參考。希望能為大家的研究工作開拓思路。

⊙作者：呂明，王泰一，田曉軒，石鑫慧，樊官偉，張硯，朱彥

⊙編輯：小余

以通利血脈、促進(jìn)血行和消散淤血為主要功效，用于治療淤血病證的藥物，稱為活血化瘀藥?；钛鲋谐伤帲╬romotingblood circulation and removing blood stasis, PBCRBS）臨床上常用于心腦血管相關(guān)疾病，具有抗血栓、抗凝血及防治動(dòng)脈硬化斑塊形成等作用，尤其在抗血栓方面，具有顯著療效。與抗血栓西藥相比，活血化瘀中藥盡管抗血栓作用平和，但具有多途徑、多靶點(diǎn)且不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)。目前，活血化瘀中成藥的應(yīng)用十分廣泛，具有很好的療效，但因種類繁多、成分復(fù)雜，其協(xié)同配伍機(jī)制尚不明確。另外，與西藥相比，中成藥功能主治的描述普遍缺乏精準(zhǔn)的適應(yīng)癥表述，制約了其臨床的有效和安全應(yīng)用。因此，運(yùn)用簡(jiǎn)便有效的研究思路，分析活血化瘀中成藥配伍規(guī)律及其協(xié)同配伍抗血栓作用機(jī)制甚為有益。

材料與方法

方劑和單體收集

方劑主要來(lái)源于藥源網(wǎng)、找藥網(wǎng)及《中國(guó)藥典》和其他參考文獻(xiàn)。遴選原則：

①藥品說(shuō)明書功效主治中含有“活血化瘀”或“抗血栓”相關(guān)字樣。

②經(jīng)國(guó)家食品藥品管理總局（CFDA）網(wǎng)站查詢，具有“國(guó)藥準(zhǔn)字Z****”批準(zhǔn)文號(hào)。

③藥品主要成分為2味或2味以上中藥復(fù)方。

④成分相同、劑型不同的方劑按一個(gè)品種統(tǒng)計(jì)。單體主要通過(guò)TCMSP、TCMID、TCM-ID和TCMDatabase@Taiwan等數(shù)據(jù)庫(kù)查詢整理，結(jié)合PubChem和eMolecules數(shù)據(jù)庫(kù)查詢單體對(duì)應(yīng)的CID或CAS號(hào)，建立中藥單體數(shù)據(jù)源。

信息錄入

將上述遴選出的方劑經(jīng)專人分類整理后，輸入中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)（TICMISS,V2.0），由雙人負(fù)責(zé)校準(zhǔn)，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。將建立的中藥單體數(shù)據(jù)導(dǎo)入ingenuitypathway analysis（IPA）中，IPA通過(guò)單體的CID或CAS號(hào)識(shí)別數(shù)據(jù)。

分析方法

方劑分析：使用中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)“方劑優(yōu)化分析”功能，對(duì)活血化瘀中成藥進(jìn)行顯性和隱性配伍規(guī)律分析。

靶點(diǎn)分析：以血栓（thrombosis）為模型進(jìn)行檢索，得到相關(guān)分子靶點(diǎn)197個(gè)，設(shè)為集合A；IPA識(shí)別的中藥單體共計(jì)128個(gè)（丹參33個(gè)、紅花47個(gè)、川芎48個(gè)）設(shè)為集合B，二者進(jìn)行“PathExplorer”作用關(guān)系分析。用“moleculeactivity predictor（MAP）”功能預(yù)測(cè)單體對(duì)分子的上調(diào)或下調(diào)作用。用“coreanalysis”功能對(duì)作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路信息進(jìn)行總結(jié)分析。

結(jié)果

1 活血化瘀中成藥單味藥頻次統(tǒng)計(jì)

收集到的224種活血化瘀類中成藥，其中含320味中藥。頻次統(tǒng)計(jì)（頻次≥10）結(jié)果顯示，35個(gè)常用中藥中，配伍使用最多的3味藥依次為丹參、川芎和紅花，見表1。

2 活血化瘀中成藥配伍規(guī)律分析

2.1 活血化瘀中成藥高頻配伍分析 活血化瘀組方配伍規(guī)律結(jié)果顯示，3味藥配伍使用最多的是丹參、川芎和紅花，見表2。設(shè)置支持度22、置信度0.9，進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析。結(jié)果顯示，在活血化瘀中藥中，當(dāng)含有丹參、紅花時(shí)，川芎出現(xiàn)的概率約為94%，進(jìn)一步說(shuō)明3味藥的配伍使用頻繁，見表3。同時(shí)含有這3味藥的代表中成藥有：丹芎通脈顆粒、精制冠心片、樂脈顆粒、丹紅化瘀口服液和血必凈注射液等。配伍使用最多的藥對(duì)：丹參和川芎，代表方劑為通脈口服液；川芎和紅花，代表方劑為腦得生膠囊；三七和丹參，代表方劑為三七丹參片；丹參和紅花，代表方劑為丹紅注射液。

2.2 活血化瘀中成藥核心配伍分析 設(shè)置不同的支持度，對(duì)活血化瘀中成藥核心藥物組合進(jìn)行深度分析。結(jié)果顯示，隨著支持度的增加，既能體現(xiàn)不同藥物組合間的個(gè)性特征，又能突顯藥物間的核心組合。在支持度為20%時(shí)，可以明顯看到丹參、川芎、紅花三者之間在活血化瘀中成藥中核心配伍關(guān)系；隨著支持度的遞減，除上述3味活血化瘀藥外，一些清熱、補(bǔ)氣、補(bǔ)血和開竅等藥物的配伍得到體現(xiàn)，見圖1。

Figure 1 Network on core combinations in depth of PBCRBS formulae（support degree：10%,15%, 20%，confidence≥ 0.9）

3 基于IPA分析含丹參、川芎和紅花活血化瘀中成藥抗血栓作用機(jī)制

3.1 分析丹參、川芎和紅花所含單體與血栓相關(guān)靶點(diǎn)的作用關(guān)系 通過(guò)上述中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)對(duì)活血化瘀中成藥的數(shù)據(jù)挖掘分析，無(wú)論在用藥頻率還是藥物的核心組合方面，丹參、川芎和紅花的作用得以凸顯，但其協(xié)同配伍作用機(jī)制尚不清楚。通過(guò)IPA的“PathExplorer”分析和“MAP”預(yù)測(cè)功能，總結(jié)含丹參、川芎和紅花活血化瘀中成藥的協(xié)同配伍抗血栓作用機(jī)制。分析結(jié)果得到丹參（9個(gè)）、川芎（4個(gè)）和紅花（8個(gè)）所含活性成分（25個(gè)）之間協(xié)同配伍與血栓相關(guān)分子（29個(gè)）的作用關(guān)系及對(duì)分子靶點(diǎn)的上調(diào)、下調(diào)作用，其中6個(gè)分子上調(diào)，19個(gè)分子下調(diào)，4個(gè)分子雙向調(diào)節(jié)，見圖2。

Figure 2 Analysis network on collaborativecompatibility of anti-thrombotic mechanism of Danshen, Chuanxiong, Honghua

3.2 29個(gè)血栓相關(guān)分子深度核心分析 通過(guò)IPA的“coreanalysis”功能對(duì)丹參、川芎和紅花可調(diào)控的29個(gè)血栓相關(guān)分子進(jìn)行深度分析。分析結(jié)果顯示，29個(gè)血栓相關(guān)分子中有23個(gè)分子與炎癥反應(yīng)有關(guān)，如圖3。由IPA的“canonicalpathways”功能分析得知，23個(gè)炎癥反應(yīng)相關(guān)分子涉及到的通路較多，重點(diǎn)選擇與心血管（cardiovascular）疾病相關(guān)的通路進(jìn)行分析，并按照涉及的分子個(gè)數(shù)多少排序（-Log p-value為柱高，代表通路相關(guān)性；Ratio代表分子個(gè)數(shù)與通路分子總數(shù)的比值），相關(guān)性較高的為endothelin-1signaling、HF1α signaling和atherosclerosissignaling，如圖4。根據(jù)所得結(jié)果提示的信息，進(jìn)一步對(duì)丹參、川芎、紅花與29個(gè)分子的相關(guān)程度進(jìn)行總結(jié)，分析其潛在的協(xié)同配伍機(jī)制。得到3味活血化瘀中藥所含單體與NOS2（受13個(gè)單體調(diào)節(jié)）、PTGS2（受11個(gè)單體協(xié)同調(diào)節(jié)）2個(gè)炎癥相關(guān)分子及IL-6（受9個(gè)單體協(xié)同調(diào)節(jié)）、TNF（受9個(gè)單體協(xié)同調(diào)節(jié)）、IL-1β（受6個(gè)單體協(xié)同調(diào)節(jié)）3個(gè)炎癥因子關(guān)系最為密切，并且對(duì)這5個(gè)分子的作用關(guān)系均為下調(diào)。5個(gè)炎癥相關(guān)分子涉及的經(jīng)典通路相關(guān)性最高的為atherosclerosissignaling，見圖5。3味中藥所含單體和5個(gè)炎癥相關(guān)分子的詳細(xì)信息，見表4。由上述基于IPA的深度分析顯示，炎癥反應(yīng)與血栓形成的關(guān)系十分密切。通過(guò)對(duì)炎癥與血栓關(guān)系的相關(guān)文獻(xiàn)整理得知，抗炎治療可以抑制血栓的形成，抗血栓治療又可以抑制炎癥反應(yīng)；炎癥誘導(dǎo)的靜脈血栓甚至在血管未損傷的情況下仍能形成。同時(shí)，丹參、川芎和紅花3味中藥不但具有較好的抗血栓作用，而且抗炎效果顯著。3味中藥在方劑配伍中，多以君藥或臣藥與其他藥物配伍使用，在治療血栓相關(guān)疾病中起核心作用，具有顯著的臨床療效。由此推測(cè)，含丹參、川芎和紅花活血化瘀中成藥的抗血栓作用主要與其抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。

Figure 3 The relationship between inflammatory responseand thrombosis

Figure 4 23 genes of inflammatory response related cardiovascularcanonical pathways (-Log p-value: therelevance of the molecules and pathways, ratio: molecules number / total moleculesnumber of pathway)

Figure 5 5 important genes of inflammatory responserelated cardiovascular canonical pathways(-Log p-value: the relevance of the molecules and pathways, ratio:molecules number / total molecules number of pathway)

討 論

剖析中成藥治療疾病的協(xié)同配伍作用機(jī)制是當(dāng)今中藥研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為藥物多成分、多靶點(diǎn)的研究與分析提供了很好的平臺(tái)。李慧穎等使用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)整理，建立計(jì)算模型，預(yù)測(cè)作用靶點(diǎn)等途徑分析了中成藥葛根芩連湯抗二型糖尿病的可能作用網(wǎng)絡(luò)，具有很好的借鑒和指導(dǎo)意義。中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)和IPA軟件的結(jié)合使用，能夠在挖掘中成藥配伍規(guī)律的基礎(chǔ)上，分析藥物協(xié)同配伍與靶點(diǎn)的作用關(guān)系。不但為后續(xù)的研究提供了一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)易的分析研究方法，對(duì)闡明中成藥的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制也具有較大意義。在今后的臨床用藥和活血化瘀中成藥的研發(fā)中，根據(jù)臨床適應(yīng)癥，可以考慮與丹參、川芎和紅花中的單味或多味藥配伍使用，或許會(huì)達(dá)到更好的臨床療效。

活血化瘀中成藥功效主治多以血瘀證、血栓相關(guān)疾病等為主。因此，本文選用血栓為模型，研究活血化瘀中成藥的抗血栓作用機(jī)制。血栓相關(guān)疾病包括心肌梗死、腦梗死和肺栓塞；組織器官缺血、壞死等，嚴(yán)重威脅人體健康。炎癥反應(yīng)是很多疾病引發(fā)的源頭并伴隨疾病的整個(gè)過(guò)程。炎癥可誘導(dǎo)內(nèi)皮損傷，從而導(dǎo)致生理抗凝劑的缺失，血管舒張功能減弱；炎癥還可以增加促凝因子的釋放，抑制溶解纖維蛋白的活性，從而促進(jìn)血栓形成。雖然，在過(guò)去一個(gè)多世紀(jì)，血小板作為血栓與止血的中樞介質(zhì)一直是血小板生物學(xué)的研究重點(diǎn)，但近10年中，大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明血小板除止血功能外，在介導(dǎo)多種炎癥、免疫和惡性疾病的過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用?？寡ê涂寡姿幬锏穆?lián)合使用已成為心血管藥物研發(fā)的熱點(diǎn)之一。

本研究創(chuàng)新點(diǎn)在于：

①近年諸多學(xué)者使用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)分析治療一些疾病的組方規(guī)律或含一些指定中藥的用藥規(guī)律，前期的工作對(duì)指導(dǎo)方劑的配伍使用有較好的參考性。本文在此基礎(chǔ)上，結(jié)合TCMSP、TCM-ID、PubChem和eMolecules等一些現(xiàn)代的生物信息學(xué)方法，并通過(guò)IPA特有的靶點(diǎn)分析功能，為后續(xù)活血化瘀中成藥協(xié)同配伍抗血栓作用機(jī)制研究提供了一定的參考價(jià)值。

②本文選擇的分析對(duì)象為市售活血化瘀類中成藥，患者易遵醫(yī)囑選擇購(gòu)買，分析其配伍規(guī)律具有很好的現(xiàn)實(shí)意義。

③通過(guò)中醫(yī)傳承輔助系統(tǒng)和IPA等生物信息方法的聯(lián)合應(yīng)用，形成了從宏觀到微觀、從臨床應(yīng)用到生物學(xué)本質(zhì)的研究思路，為中藥的協(xié)同配伍作用機(jī)制研究提供依據(jù)。

本研究局限性：

①IPA收錄標(biāo)準(zhǔn)為影響因子大于3的文獻(xiàn)，因此可能會(huì)造成一些有效單體數(shù)據(jù)的遺漏，但在一定程度上也確保了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

②本文所得結(jié)論需要得到臨床和實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證分析。

綜上所述，丹參、川芎和紅花3味中藥在活血化瘀中成藥中配伍使用最為頻繁。含丹參、川芎和紅花活血化瘀中成藥抗血栓作用，主要與其抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)，抑制炎癥相關(guān)分子NOS2、PTGS2、IL-6、TNF和IL-1β及其相關(guān)通路，在今后含丹參、川芎和紅花活血化瘀中成藥抗血栓作用機(jī)制的研究中應(yīng)得以重視和關(guān)注。

參考文獻(xiàn)：略。