內(nèi)參對照是用來確認(rèn)凝膠中加入的樣品是否等量，特別是在比較不同樣品中蛋白的表達(dá)水平時(shí)。它們也可以用于檢查樣品是否從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上。

甚至在還沒上樣或轉(zhuǎn)膜時(shí)，也可以使用內(nèi)參對照來定量每條泳道中的總蛋白。如需要發(fā)表文章，使用內(nèi)參對照至關(guān)重要。

常用的內(nèi)參對照：

上樣與跑膠：

使用凝膠上樣槍頭或微型注射器將樣品完整的加入孔中。注意不要接觸到孔的底部，否則會產(chǎn)生扭曲的條帶。

上樣量不要過度。如果樣品溢入相鄰的加樣孔中，會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

每孔加入 20-40 μg 總蛋白。

凝膠應(yīng)該浸沒在含有 SDS 的電泳緩沖液中，非變性凝膠電泳除外。

標(biāo)準(zhǔn)的 PAGE 電泳緩沖液是 1x Tris-甘氨酸：

25 mM Tris base

190 mM 甘氨酸

0.1% SDS

pH 約為8.3

按照推薦時(shí)間跑膠；不同機(jī)器的時(shí)間各不相同（根據(jù)電壓，跑膠 1 小時(shí)至過夜不等）。

當(dāng)染料到達(dá)凝膠底部時(shí)，關(guān)閉電源。此時(shí)蛋白將緩慢地從凝膠中洗脫出來，因此凝膠不要保存在溶液中；應(yīng)立刻進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

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