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凱基BCA蛋白含量檢測試劑盒
一、 試劑盒說明
BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測定的簡單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。檢測濃度下限達(dá)到25微克/毫升，最小檢測蛋白量達(dá)到0.5微克，待測樣品體積為1～20微升。
二、 試劑盒組份
三、 操作步驟
A． 酶標(biāo)板操作
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取一塊酶標(biāo)板，按照下表加入試劑
2. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻；
3. 各孔加入200μL BCA工作液；
4. 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線；
5. 稀釋待測樣品至合適濃度，使樣品稀釋液總體積為20μL，加入BCA工作液200μL，充分混勻，37℃放置30分鐘后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號管做參比，在562nm波長下比色，記錄吸光值；
6. 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白含量（μg），除以樣品稀釋液總體積（20μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單位：μg/μL）。
B． 分光光度計測定
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：各管按照下表加入試劑
2. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻；
3. 各管加入1000μL BCA工作液；
4. 各管充分混勻，37℃放置30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線；
5. 稀釋待測樣品至合適濃度，樣品稀釋液總體積為100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混勻，37℃放置30分鐘后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號管做參比，在562nm波長下比色，記錄吸光值；
6. 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白含量（μg），除以樣品稀釋液總體積（100μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單位：μg/μL）。
四、 注意事項(xiàng)
1. 配制好的混合BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
2. 加入BCA工作液后，也可以在室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應(yīng)會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。
3. 待測樣品濃度在50～2000微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
4. BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于1mM.不適用BCA法時建議使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
5. 操作時要帶手套。
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