|
流式是什么? 臨床常說(shuō)的“流式”是流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry)的簡(jiǎn)稱,因其檢測(cè)在液體中移動(dòng)的細(xì)胞或粒子而得名。 具體來(lái)說(shuō),單個(gè)細(xì)胞懸液中加入一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的抗體,抗體通過(guò)抗原抗體反應(yīng)與細(xì)胞上的抗原結(jié)合。在流式細(xì)胞儀中,細(xì)胞在鞘液中單個(gè)流動(dòng),就像紅細(xì)胞單個(gè)通過(guò)毛細(xì)血管一樣通過(guò)檢測(cè)口,儀器發(fā)出一個(gè)或多個(gè)激光束激發(fā)標(biāo)記在細(xì)胞上的熒光物質(zhì)。從熒光物質(zhì)發(fā)出的光被收集、分離、檢測(cè),其數(shù)據(jù)被傳輸?shù)娇刂屏魇郊?xì)胞儀的計(jì)算機(jī)供分析。 流式的臨床應(yīng)用 在臨床上,流式細(xì)胞術(shù)被用于精確檢測(cè)異常細(xì)胞群,如對(duì)血液系統(tǒng)腫瘤進(jìn)行診斷和分型,或在HIV感染時(shí)檢測(cè)CD4 T淋巴細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)也可用于檢測(cè)生理過(guò)程,例如移植前干細(xì)胞計(jì)數(shù)(CD34陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù))或組織相容性測(cè)試。 流式為什么能夠檢測(cè)疾?。?/p> 在正常細(xì)胞分化成熟過(guò)程中,不同的抗原會(huì)在其表面或內(nèi)部出現(xiàn)或消失,通過(guò)檢測(cè)這些抗原的存在或缺失,我們能夠確定細(xì)胞的種類和發(fā)育階段。這些在白細(xì)胞表面的抗原,又稱為白細(xì)胞分化抗原或簇分化抗原 (cluster of differentiation, CD)。疾病情況下,例如白血病時(shí),本來(lái)數(shù)量很少或本不應(yīng)該出現(xiàn)的原始細(xì)胞,大量出現(xiàn)在骨髓或外周血中,通過(guò)檢測(cè)這些細(xì)胞CD分子表達(dá)情況,可以準(zhǔn)確知道這些細(xì)胞的類型,以便進(jìn)行診斷和治療。臨床常用的CD分子見(jiàn)下表(Biomedical Uses of Flow Cytometry. James L. Weaver and Maryalice Stetler-Stevenson From: Molecular Biomethods Handbook, 2nd Edition. Edited by: J. M. Walker and R. Rapley ? Humana Press, Totowa, NJ 1039)。 流式的優(yōu)點(diǎn)是什么? 流式最大的優(yōu)點(diǎn)就是特異性和敏感性都很好,并且檢測(cè)起來(lái)速度很快。 WHO血液系統(tǒng)腫瘤的分類基于: 形態(tài)學(xué)(morphology)、 免疫表型(immunophenotype)、 遺傳學(xué)異常(genetic abnormalities)和 臨床特征(clinical features)的。 一些造血系統(tǒng)腫瘤具有特異性的免疫表型,在缺乏免疫表型檢測(cè)的情況下診斷非常困難。因此懷疑血液系統(tǒng)惡性腫瘤的標(biāo)本應(yīng)該通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或免疫組織化學(xué)檢測(cè)免疫表型。與免疫組化檢測(cè)相比,流式具有更高的靈敏度,主觀性更低,也更快速,在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)就能夠?qū)Π籽∵M(jìn)行分型。在評(píng)估血液系統(tǒng)疾病是否能夠使用單克隆抗體治療或其治療效果時(shí),流式也具有明顯的優(yōu)勢(shì),因?yàn)閱慰沟陌锌乖仨氃诩?xì)胞表面表達(dá),才能治療有效。 流式的標(biāo)本要求 液體標(biāo)本是流式細(xì)胞儀的理想標(biāo)本類型,外周血和骨髓標(biāo)本是最常見(jiàn)的,使用枸櫞酸鈉和EDTA抗凝均可,即使用綠頭或紫頭抗凝管采集流式標(biāo)本。胸水、腹水、腦脊液也是很常見(jiàn)的標(biāo)本類型,因?yàn)檫@些標(biāo)本中細(xì)胞數(shù)量可能比較少,送檢標(biāo)本量要盡可能的多一些。當(dāng)然,能夠獲得單細(xì)胞懸液的固體組織也是可以進(jìn)行檢測(cè)的。流式檢測(cè)的是細(xì)胞表面的抗原,標(biāo)本新鮮很重要,最好在24h內(nèi)送檢,室溫保存即可。 需要注意的是,慢性粒單核細(xì)胞白血病(Chronic myelomonocytic leukemia, CMML) 和陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿 (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH) 檢測(cè)一定要使用外周血標(biāo)本, 而想要診斷骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes, MDS),最好使用骨髓標(biāo)本。 流式檢測(cè)在血液病中起什么作用? 血液病患者的整個(gè)病程中需要多次進(jìn)行流式檢測(cè):初診時(shí)需要流式幫助確診和分型,病程中需要流式監(jiān)測(cè)治療效果,骨髓移植時(shí)需要流式對(duì)供者細(xì)胞進(jìn)行CD34陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù),化療或者骨髓移植完全緩解后需要流式進(jìn)行微小殘留病變(minimal residual disease, MRD)的檢測(cè)。同時(shí),流式還可以通過(guò)抗原表達(dá)模式的不同進(jìn)行疾病診斷。 如下圖左為正常骨髓下階段粒細(xì)胞的CD13/CD16表達(dá)模式,而右圖則是MDS患者下階段粒細(xì)胞的CD13/CD16表達(dá)模式。 一篇發(fā)表在2015年BLOOD雜志上的文章發(fā)現(xiàn),外周血中CD14 CD16-單核細(xì)胞在單核細(xì)胞群中比例超過(guò)94%時(shí),診斷CMML的敏感性和特異性都在90%以上。其模式如下,左圖為CMML,右圖為反應(yīng)性單核細(xì)胞增多。 (Characteristic repartition of monocyte subsets as a diagnostic signature of chronic myelomonocytic leukemia. Blood. 2015; 125 (23): 3618- 3626) 流式報(bào)告是怎么樣的? 流式報(bào)告的形式可以是散點(diǎn)圖、直方圖,也可以是數(shù)值的。我們會(huì)在散點(diǎn)圖中用不同顏色標(biāo)注出異常細(xì)胞和標(biāo)本中殘留的正常細(xì)胞(通常是淋巴細(xì)胞,作為內(nèi)對(duì)照),描述異常細(xì)胞的比例及表達(dá)的抗原,最后給出結(jié)論及建議。下面分別為白血病和PNH的流式報(bào)告,我們分別使用了散點(diǎn)圖和直方圖進(jìn)行報(bào)告。 Q:我們開(kāi)展的流式項(xiàng)目有哪些? 急性白血病免疫分型 (Acute leukemia immunophenotyping) 淋巴細(xì)胞增殖性疾病免疫分型 (lymphoproliferative disorders Immunophenotyping) B淋巴細(xì)胞增殖性疾病免疫分型 (B lymphoproliferative disorders immunophenotyping) T淋巴細(xì)胞增殖性疾病免疫分型 (T lymphoproliferative disorders Immunophenotyping) CD55、CD59檢測(cè)(PNH) (CD55、CD59 analysis, PNH) 白血病/淋巴瘤免疫分型(復(fù)查) /微小殘留白血病檢測(cè) (minimal residual disease, MRD) MDS免疫表型分型 (MDS immunophenotyping) 漿細(xì)胞疾病免疫分型 (Plasma cell disorders Immunophenotyping) 腦脊液細(xì)胞免疫表型分析 (Cerebrospinal fluid cells Immunophenotyping) TCRvβ克隆性檢測(cè) (TCRvβclonality detection) ZAP70,CD38(CLL/SLL) (ZAP70 and CD38 detection in CLL/SLL) CD34陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù) (CD34 cell count) 作者簡(jiǎn)介 |
|
|
來(lái)自: angelzhang69 > 《檢驗(yàn)相關(guān)》