草履蟲(chóng)的培養(yǎng)方法 一、草履蟲(chóng)（Paramecium 
草履蟲(chóng)屬于原生動(dòng)物門(mén)的纖毛綱，是一類(lèi)體型較大的原生動(dòng)物，在自然界廣泛分布，又容易采集和培養(yǎng)，是觀察研究原生動(dòng)物的好材料。草履蟲(chóng)種類(lèi)很多，其中體型最大和最常見(jiàn)的是大草履蟲(chóng)（Paramecium caudatum）。 1.采集 
草履蟲(chóng)通常生活在水流速度不大的水溝、池塘和稻田中，大多積聚在有機(jī)質(zhì)豐富，光線充足的水面附近。當(dāng)水溫在14～22℃時(shí)，繁殖最旺盛，數(shù)目最多、草履蟲(chóng)的這些習(xí)性，是確定采集地點(diǎn)和方法的重要依據(jù)。 
(1)到水溝、池塘采集草履蟲(chóng)。水溝和池塘是草履蟲(chóng)的主要生活場(chǎng)所。在氣候溫暖的季節(jié)，到水質(zhì)沒(méi)有污染的水溝、池塘岸邊，選擇枯枝落葉多的地方，用廣口瓶沿水面采集池水，這樣的池水往往含有許多草履蟲(chóng)。為了更有把握，可在不同地點(diǎn)多采幾瓶。采集后，廣口瓶?jī)?nèi)要放置少許水草，瓶口不要加蓋，以免草履蟲(chóng)因缺氧而窒息死亡。 
回到實(shí)驗(yàn)室后，要把盛有池水的廣口瓶放在溫暖、明亮、陽(yáng)光又不直射的地方，使瓶中的革履蟲(chóng)迅速繁殖。三五天以后，對(duì)著光線用肉眼觀察，如果看到水中有許多小白點(diǎn)在不停地游動(dòng)，很可能就是草履蟲(chóng)。這時(shí)，用吸管吸取一滴帶有小白點(diǎn)的水，放在載玻片上，用顯微鏡進(jìn)行觀察，在視野中會(huì)看到各種微小生物。如果發(fā)現(xiàn)有象倒置的草鞋一樣的小動(dòng)物，不停地螺旋運(yùn)動(dòng)，那就是草履蟲(chóng)，采集就成功了。 
(2)到稻田采集草履蟲(chóng)。在稻田灌水期間，尋找田中的舊稻茬，用廣口瓶在稻茬附近取水，隨后放進(jìn)幾根舊稻草。這樣的水中往往會(huì)有許多草履蟲(chóng)。返回實(shí)驗(yàn)室后，放在溫暖明亮處，三五天后，用顯微鏡檢查是否有草履蟲(chóng)存在。 
(3)從新鮮稻草上采集草履蟲(chóng)。當(dāng)環(huán)境變得干旱或寒冷時(shí)，草履蟲(chóng)能向身體表面分泌一層蛋白質(zhì)的薄膜，蟲(chóng)體不吃不動(dòng)，進(jìn)入休眠狀態(tài)。這種狀態(tài)叫作包囊。在稻田水抽干時(shí)，草履蟲(chóng)便形成許多包囊，附著在稻草近根部的幾節(jié)莖上。因此，可選取新鮮稻草近根部的幾節(jié)，剪成3～4厘米長(zhǎng)的小段，放入廣口瓶中，注入清水，放在明亮溫暖處，一周以后，用顯微鏡檢查是否有草履蟲(chóng)。 2.配制培養(yǎng)液 
草履蟲(chóng)的食物主要是細(xì)菌。為了培養(yǎng)繁殖草履蟲(chóng)，必須配制含有大量細(xì)菌的培養(yǎng)液。培養(yǎng)液的配制方法通常有以下兩種。 (1)稻草培養(yǎng)液。取新鮮潔凈的稻草，去掉上端和基部的幾節(jié)，將中部稻莖剪成3～4厘米長(zhǎng)的小段，按1克稻草加清水100毫升的比例，將稻草和清水放入大燒杯中，加熱煮沸10～15分鐘，當(dāng)液體呈現(xiàn)黃褐色時(shí)停止加熱。這樣的液體，由于加熱煮沸，只留下了細(xì)菌芽孢，其它生物已均被殺死，為培養(yǎng)草履蟲(chóng)創(chuàng)造了良好條件。為了防止空氣中其它原生動(dòng)物的包囊落入和蚊蟲(chóng)產(chǎn)卵，燒杯口要用雙層紗布包嚴(yán)。然后放置在溫暖明亮處進(jìn)行細(xì)菌繁殖。 
經(jīng)過(guò)3～4天，稻草中的枯草桿菌的芽孢開(kāi)始萌發(fā)，并依靠稻草液中的豐富養(yǎng)料迅速繁殖，液體逐漸混濁，等到大量細(xì)菌在液體表面形成了一層灰白色薄膜時(shí)，稻草培養(yǎng)液便制成了。由于草履蟲(chóng)喜歡微堿性環(huán)境，如果培養(yǎng)液呈酸性，可用1％碳酸氫鈉調(diào)至微堿性，但pH值不能大于7.5。 
(2)麥粒培養(yǎng)液。將5克麥粒（大麥、小麥均可）放入1000毫升清水中，加熱煮沸，煮到麥粒脹大裂開(kāi)為止。然后在溫暖明亮處放置3～4天，便制成了麥粒培養(yǎng)液，此時(shí)培養(yǎng)液中已繁殖有大量的細(xì)菌。 3.接種 
接種是指將采集來(lái)的草履蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)液的過(guò)程。接種草履蟲(chóng)時(shí)必須提純，否則會(huì)混入其它小動(dòng)物。這不但會(huì)影響草履蟲(chóng)的純度，而且一旦混入草履蟲(chóng)的天敵水輪蟲(chóng)（Rotaria），將會(huì)使培養(yǎng)液中草履蟲(chóng)的數(shù)量急劇下降。 
接種時(shí)，先將含有草履蟲(chóng)的水液吸到表面皿中，再將表面皿置于低倍顯微鏡或解剖鏡下檢查，發(fā)現(xiàn)有草履蟲(chóng)后，用口徑不大于0.2毫米的微吸管，將表面皿中草履蟲(chóng)逐個(gè)吸出，接種到培養(yǎng)液的廣口瓶中進(jìn)行繁殖。如果要培養(yǎng)純系的草履蟲(chóng)，可按上述方法，在顯微鏡或解剖鏡下，從表面皿中吸出一個(gè)草履蟲(chóng)，放入盛凹玻片中，上面再覆蓋一片凹玻片，用以防止培養(yǎng)液干燥。待草履蟲(chóng)經(jīng)過(guò)橫分裂達(dá)到20～30個(gè)個(gè)體時(shí)，移到培養(yǎng)液的廣口瓶中進(jìn)行繁殖。 4.培養(yǎng) 
(1)將接種有草履蟲(chóng)的培養(yǎng)液的廣口瓶，放在溫暖明亮處進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的容器口要用紗布包嚴(yán)。大約1周后，就會(huì)有大量草履蟲(chóng)出現(xiàn)。 
(2)如果是長(zhǎng)期培養(yǎng)，就要定期更新培養(yǎng)液。這是因?yàn)殡S著蟲(chóng)體大量繁殖，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)逐漸減少，而蟲(chóng)體排出代謝物卻又不斷增加，這就會(huì)引起草履蟲(chóng)數(shù)量減少甚至全部死亡。因此在培養(yǎng)過(guò)程中，每隔3天左右須更新一次培養(yǎng)液。更新時(shí)，用吸管從廣口瓶底部吸去培養(yǎng)液及沉淀物，每次要吸去一半培養(yǎng)液，加入等量新鮮培養(yǎng)液。這樣可使草履蟲(chóng)長(zhǎng)期得到保存。 

草履蟲(chóng)的采集和培養(yǎng) 1、采集  
地點(diǎn)：在比較肥沃、水不太流動(dòng)的污水溝、河溝或池塘里，溝水較淺，淤泥黑色，泥表有一乳白色的薄膜。 
方法：用器皿輕輕刮取白膜，連同少許的水放于瓶中；或用器皿從表層取一些水，向光觀察，如果發(fā)現(xiàn)其中有針尖大小的小白點(diǎn)在游動(dòng)，這可能就是草履蟲(chóng)和其他原生動(dòng)物，可以采回來(lái)。 2、分離 
       牛肉汁分離法  取載玻片平放在臺(tái)上，先用清潔的吸管吸取牛肉汁，滴一滴在玻片左端；再用另一根小吸管吸取草履蟲(chóng)液，滴在玻片右端。用解剖針從牛肉汁一端引一條溝，把這兩個(gè)液滴連接起來(lái)。草履蟲(chóng)對(duì)牛肉汁反應(yīng)較敏感，它們很快經(jīng)過(guò)小溝被引到牛肉汁一端來(lái)。待草履蟲(chóng)聚集后用吸水紙切斷水線，用吸管吸取牛肉汁中的草履蟲(chóng)，接種到培養(yǎng)液內(nèi)，就可培養(yǎng)出大量草履蟲(chóng)供實(shí)驗(yàn)用。 3、培養(yǎng) 
     牛奶液培養(yǎng)  將牛奶液攪拌均勻后，移入草履蟲(chóng)，溫度保持在攝氏22度，二三日后，草履蟲(chóng)迅速繁殖，并且出現(xiàn)處于分裂生殖狀態(tài)的草履蟲(chóng)。5日內(nèi)蟲(chóng)體數(shù)量達(dá)到高峰，以后每隔2星期在原有的培養(yǎng)液內(nèi)再加入牛奶液，可長(zhǎng)期維持草履蟲(chóng)的生活。 1 草履蟲(chóng)種源的釆集  在無(wú)化學(xué)污染的湖泊、池塘、小河和城市公園內(nèi)水域，用500ml燒杯取一些水，在水中取一些落葉放入燒杯，投入15粒小麥。20～28℃靜置10d后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)許多草履蟲(chóng)。另一種方法是取水體內(nèi)水生植物在杯內(nèi)洗，反復(fù)數(shù)次，用防蚊網(wǎng)過(guò)濾，濾下液靜置5~8d，投入15粒小麥，水面附近有白色移動(dòng)的水紋，取之可作為草履蟲(chóng)培養(yǎng)的種源。 
2 草履蟲(chóng)純培養(yǎng)  常規(guī)接種方法，用微吸管在解剖鏡下取一個(gè)草履蟲(chóng)移到厚凹玻片（1ml）內(nèi)，反復(fù)用備好的培養(yǎng)液洗5次，再移入備有20ml培養(yǎng)液的試管內(nèi)培養(yǎng)。1～2周后擴(kuò)大培養(yǎng)。 3 草履蟲(chóng)短期高密度快速培養(yǎng)方法   3.1  培養(yǎng)液配方 
小麥粒培養(yǎng)液：將10～12粒小麥放入500ml湖水，煮沸5min，加蓋冷卻24h后接種。 蛋白胨培養(yǎng)液：1g蛋白胨融入500ml自來(lái)水，煮沸，加蓋冷卻24h后接種。 牛奶培養(yǎng)液：將鮮牛奶以1：200的比例調(diào)配（酸奶更好）后接種。 大米培養(yǎng)液：將10粒米浸入500ml自來(lái)水中，加蓋放置24h后接種。 柵藻培養(yǎng)液：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的柵藻，稀釋4倍后接種。 
湖水培養(yǎng)液：從無(wú)污染的湖中取水，煮沸，加蓋放置24小時(shí)后接種。 
3.2  培養(yǎng)方法  培養(yǎng)初期，小麥粒培養(yǎng)液是最好的方法，在試管內(nèi)放入1粒煮過(guò)的小麥粒，置于無(wú)太陽(yáng)光直射的地方，2周后用100ml的燒杯擴(kuò)大培養(yǎng)，杯內(nèi)投入5粒煮過(guò)的麥粒，每天滴入1滴稀釋3倍的鮮奶。使用蛋白胨和牛奶要注意加入的量不要過(guò)多；移入500ml燒杯后，每天加入1～2滴牛奶，十天左右可以得到高密度的草履蟲(chóng)種群，不需要進(jìn)行種群**，即可用于教學(xué)實(shí)驗(yàn)；蛋白胨不能長(zhǎng)期放置，會(huì)發(fā)臭，變質(zhì)，利用蛋白胨培養(yǎng)草履蟲(chóng)比利用牛奶更難控制。牛奶和蛋白胨的投放量與草履蟲(chóng)數(shù)量成正比。初次操作，應(yīng)把培養(yǎng)液平均5份，置于5只100ml燒杯，編號(hào)1～5；培養(yǎng)的第一周，在編號(hào)1～5的燒杯里分別投放1、2、4、7、12滴稀釋10倍后的牛奶，每天觀察2次；第二周餌料的投放量總結(jié)第一周的培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。湖水和柵藻培養(yǎng)液只能維持草履蟲(chóng)10～16天的營(yíng)養(yǎng)，用于初期的少量培養(yǎng)比較好操作。大米培養(yǎng)液的水質(zhì)較渾濁。 
培養(yǎng)期間，燒杯口需要用3～4層紗布封口，以防其他原生動(dòng)物包囊進(jìn)入培養(yǎng)液。另外，需要每天早晚2次進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)草履蟲(chóng)**于水底，表明溶液中養(yǎng)料不足，倒掉一半上清液，加入適量營(yíng)養(yǎng)液；發(fā)現(xiàn)草履蟲(chóng)**在燒杯上部或水線以下的玻璃壁上，表明溶液中溶氧不足，原因是草履蟲(chóng)密度過(guò)高或是水環(huán)境惡化。應(yīng)立即把草履蟲(chóng)移入新液或擴(kuò)大培養(yǎng)；發(fā)現(xiàn)草履蟲(chóng)日漸減少，可能有吸管蟲(chóng)等草履蟲(chóng)天敵，此時(shí)應(yīng)倒掉所有培養(yǎng)的草履蟲(chóng)，將器皿清洗干凈，重新接種培養(yǎng)。 4  高密度草履蟲(chóng)種群的常年培養(yǎng)與管理 
4.1  培養(yǎng)  取帶綠色的湖水200ml于250ml的錐形瓶中，投入10粒小麥，取4層紗布封口，煮沸5min，靜置兩天。接種數(shù)毫升已經(jīng)提純的草履蟲(chóng),置于陰暗背光處。10～15d后準(zhǔn)備3～5個(gè)1000ml錐形瓶，每個(gè)瓶盛湖水750ml，投入20粒小麥，紗布封口，煮沸5min。2d后每個(gè)瓶接種草履蟲(chóng)50ml。培養(yǎng)溫度10～28℃（一年室內(nèi)溫度變化范圍）。 
4.2  管理  每周觀察一次，如果草履蟲(chóng)分布于錐形瓶底，上層分布很少或沒(méi)有，應(yīng)立刻煮麥粒加入。如果當(dāng)天無(wú)時(shí)間煮麥粒，可先加入一滴牛奶；如果草履蟲(chóng)**在瓶壁或培養(yǎng)液上層，表明培養(yǎng)液缺氧或營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，這種情況大多出現(xiàn)在滴加過(guò)多牛奶后的第2d，或加入過(guò)多麥粒后的3～4d，或培養(yǎng)液加入過(guò)多，水面上升，水面與空氣接觸的表面積變小而造成草履蟲(chóng)缺氧，應(yīng)立即把上層的草履蟲(chóng)移到干凈的錐形瓶，加入適量濾紙過(guò)濾的湖水。 
每2～3周更新一次麥粒，用13號(hào)水生生物網(wǎng)過(guò)濾一次培養(yǎng)液，網(wǎng)上物洗入大燒杯作為小型淡水渦蟲(chóng)的餌料或稀釋后接種水蚤或輪蟲(chóng)。 
5  草履蟲(chóng)采集液、培養(yǎng)液和廢棄液的綜合開(kāi)發(fā)利用  草履蟲(chóng)培養(yǎng)液和置換出來(lái)的廢液將其稀釋3倍后接種水蚤，2～3周后會(huì)出現(xiàn)許多水蚤；將其稀釋2倍后接種輪蟲(chóng)（Rotaria），2～3周后會(huì)出現(xiàn)許多輪蟲(chóng)。草履蟲(chóng)是小達(dá)氏渦蟲(chóng)（Microdalyellia）、杰氏渦蟲(chóng)（Gieysztoria）等小型淡水渦蟲(chóng)的理想餌料，一只饑餓的中國(guó)小達(dá)氏渦蟲(chóng)（Microdalyellia sinensis）1min內(nèi)能捕食20～40只草履蟲(chóng)。也是實(shí)驗(yàn)室人工孵化東方蠑螈、小型觀賞或?qū)嶒?yàn)用魚(yú)的開(kāi)口餌料。輪蟲(chóng)是培養(yǎng)大口渦蟲(chóng)的優(yōu)質(zhì)餌料，一只饑
餓的管大口渦蟲(chóng)（Macrostomum tuba），5min內(nèi)能捕食30多只旋輪蟲(chóng)【1】
。草履蟲(chóng)培養(yǎng)廢液稀釋3倍后倒入大瓷盤(pán)，實(shí)驗(yàn)室夜間開(kāi)窗，不久有許多搖蚊幼蟲(chóng)滋生，取羽化前的搖蚊幼蟲(chóng)喂淡水三腸目渦蟲(chóng)，可以3～5個(gè)月不換水。在50kg容量的玻璃缸內(nèi)注滿(mǎn)清水，植入3～5條水草，并用剪草法控制水草數(shù)量，靠窗，3d后把廢棄的草履蟲(chóng)采集液或培養(yǎng)液2000ml倒入玻璃缸，移入枝角類(lèi)，2周后移入數(shù)條三腸目、大口蟲(chóng)目渦蟲(chóng)，可以維持水蚤、水螅、渦蟲(chóng)生長(zhǎng)繁殖達(dá)3～5個(gè)月。水螅、三角渦蟲(chóng)、大口渦蟲(chóng)、草履蟲(chóng)、輪蟲(chóng)可以混養(yǎng)；水蚤被水螅捕食；水螅的排泄物和被水螅殺死沉于水底的死水蚤被渦蟲(chóng)攝食，可以起到凈化水質(zhì)的作用；渦蟲(chóng)的排泄物被細(xì)菌分解，細(xì)菌和有機(jī)碎屑又被草履蟲(chóng)、輪蟲(chóng)和水蚤捕食；草履蟲(chóng)、輪蟲(chóng)又是大口渦蟲(chóng)的餌料。這種培養(yǎng)條件下，不必?fù)Q水，水質(zhì)清澈，玻璃缸壁不長(zhǎng)青苔，保持一定水位高度即可。我們實(shí)驗(yàn)室數(shù)年來(lái)模仿自然生態(tài)，建立這種生態(tài)培養(yǎng)模式，節(jié)約許多人力和水資源，。并且在這種人工水生態(tài)環(huán)境下成功繁殖出一種淡水針海綿（見(jiàn)圖）。 

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6  草履蟲(chóng)的收集、麻醉及其食物泡觀察 
6.1 收集草履蟲(chóng)  采用冷凍法：把1000ml草履蟲(chóng)液倒入量桶內(nèi)，放入100g冰塊，待冰融化后，用虹吸法抽除上清液即可。草履蟲(chóng)遇冷下沉，是收集草履蟲(chóng)的理想方法。 
6.2 麻醉草履蟲(chóng)  一滴草履蟲(chóng)液滴在玻片上，加一滴5％的乙醇，1～2min后加蓋玻片，草履蟲(chóng)漸漸停止活動(dòng)，不變形，纖毛擺動(dòng)非常緩慢，伸縮泡和纖毛的活動(dòng)以及細(xì)胞核易于觀察。5％的乙醇溶液需要用剛過(guò)濾后的水簇箱飼養(yǎng)水或新鮮池水臨時(shí)配制，當(dāng)天使用。 
6.3 食物泡觀察  在100ml草履蟲(chóng)培養(yǎng)液內(nèi)滴入0.5～1ml 0.01％中性紅溶液或亞甲基藍(lán)溶液，此時(shí)，草履蟲(chóng)培養(yǎng)液幾乎無(wú)色，而顯微鏡下僅草履蟲(chóng)的食物泡呈鮮紅色或藍(lán)色，利用上述【6.2】的麻醉方法，可以清晰地觀察到食物泡的遷移活動(dòng)。在這種染料濃度環(huán)境下，不會(huì)影響草履蟲(chóng)的正常生長(zhǎng)。 
7 草履蟲(chóng)培養(yǎng)注意事項(xiàng)與小結(jié)  只要有水生動(dòng)物生活的水域，以本文方法都可以輕易采集到草履蟲(chóng)。草履蟲(chóng)的培養(yǎng)材料是一個(gè)重要因素
[2~5]
，但不是決定因素。本文認(rèn)為，培養(yǎng)液的濃度是關(guān)鍵因素。其濃度在培養(yǎng)過(guò)程中是動(dòng)態(tài)變化的，如，剛剛加入牛奶
或蛋白胨，第1d正常，第2～3d全部死完，這決不是餓死的，是高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)誘發(fā)細(xì)菌大量繁殖、耗氧引起水體惡化造成的。培養(yǎng)液內(nèi)所需牛奶的濃度直接與草履蟲(chóng)的密度相關(guān)，培養(yǎng)期間需要每天數(shù)次觀察草履蟲(chóng)的動(dòng)態(tài)，根據(jù)草履蟲(chóng)的密度和分布動(dòng)態(tài)，隨時(shí)作出調(diào)整。本文的常年培養(yǎng)方法是每7～14d檢查一次即可，其麥粒的投放數(shù)量是經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期連續(xù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，不斷調(diào)整得出的結(jié)論；麥粒過(guò)少，草履蟲(chóng)生長(zhǎng)緩慢而使其它原生動(dòng)物孳生，草履蟲(chóng)種群處于劣勢(shì)而被淘汰；過(guò)多則使溶液中細(xì)菌過(guò)度繁殖，造成水體溶解氧減少，引起草履蟲(chóng)大量死亡。第1次接種需移入大量的草履蟲(chóng)，促其盡快形成生，以此確保草履蟲(chóng)種群的純度