精準(zhǔn)醫(yī)療是未來醫(yī)療的方向，而醫(yī)療的起點是診斷，只有精確的診斷才可能談得上精確治療。隨著分子檢測技術(shù)的發(fā)展，越來越多的病原體檢測都可實現(xiàn)精準(zhǔn)診斷。分子檢測技術(shù)以DNA和RNA檢測技術(shù)為主要代表，由于RNA僅在活的病原體中存在，故以RNA為靶標(biāo)的診斷技術(shù)可以反應(yīng)病原體的存活狀態(tài)，可以用于療效監(jiān)測，指導(dǎo)臨床精準(zhǔn)用藥，達(dá)到精準(zhǔn)醫(yī)療的目的。目前實現(xiàn)RNA檢測的主要有三種技術(shù)，分別為TMA,NASBA和SAT技術(shù)。

DNA檢測技術(shù)

主要包括了聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)和連接酶鏈反應(yīng)(link chain reaction，LCR)。PCR電泳因其檢測結(jié)果存在假陽性而導(dǎo)致特異性下降；而熒光定量PCR雜交法、PCR微孔板雜交法及套式PCR等方法，較好地解決了敏感性和特異性問題。LCR法可解決PCR中存在的假陽性問題，敏感性也有所提高，是一種較好的檢測方法。

基于DNA的體外擴(kuò)增其模板既可以來自于活菌也可來自死菌，因此不能作為非病毒病原體的活菌診斷，即使病人得到了有效的治療,病原體死亡DNA仍然能夠穩(wěn)定存在至少3周時間,檢驗結(jié)果無法及時反應(yīng)治愈結(jié)果,不利于臨床獲取有價值的診斷信息,從而導(dǎo)致錯誤治療和抗生素過度使用.并且DNA穩(wěn)定而不容易降解的特性，也較易在實驗過程中產(chǎn)生污染。

RNA檢測技術(shù)

RNA為單鏈結(jié)構(gòu)，容易降解，在死菌中不易被檢測到同時也不易造成污染。最早由美國Gen-Probe公司開發(fā)的TMA技術(shù)是逆轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)的體外特異性擴(kuò)增rRNA直接進(jìn)行檢測的一項新的RNA檢測技術(shù)。rRNA即核糖體RNA，是細(xì)菌核糖體的主要成分，在每個原核生物中存在約103-104個拷貝。

國內(nèi)自主研發(fā)的RNA檢測技術(shù)稱為RNA實時熒光恒溫擴(kuò)增檢測技術(shù)（Simultaneous Amplification and Testing）,簡稱SAT技術(shù)，其基本原理如下：

1.SAT技術(shù)以rRNA為靶標(biāo)，在M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶作用下產(chǎn)生一條cDNA鏈

2.M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶的RNaseH酶活性將雜合的RNA/DNA中RNA降解，再經(jīng)M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶作用產(chǎn)生一個cDNA拷貝

3.隨后T7RNA多聚酶以反轉(zhuǎn)錄的DNA為模板擴(kuò)增產(chǎn)生100-1000個RNA拷貝

4.每一個RNA拷貝從反轉(zhuǎn)錄開始再一次進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)，同時擴(kuò)增產(chǎn)生的RNA拷貝與優(yōu)化的探針特異結(jié)合產(chǎn)生熒光信號

5.由熒光檢測儀捕獲熒光信號進(jìn)行分析。

SAT技術(shù)的特點：

1）快速

■  SAT技術(shù)在恒溫42℃經(jīng)40-60鐘即可獲得理想的實驗結(jié)果。

2）準(zhǔn)確

■  特異性提取、特異性引物以及特異性探針保證了檢測結(jié)果的高特異性和準(zhǔn)確性。

3）特異性提取、特異性引物以及特異性探針保證了檢測結(jié)果的高特異性和準(zhǔn)確性。低污染

■  由于擴(kuò)增產(chǎn)物為RNA，減少了PCR過程中對實驗儀器和環(huán)境造成的污染，避免了交叉污染及假陽性。

4）抗抑制

■  為了減少樣本的抑制反應(yīng)，SAT對于樣本的制備采用磁珠吸附法，特異性捕獲靶標(biāo)確保了高特異性的提取，通過水相洗滌最大程度地去除各種雜質(zhì)，進(jìn)而避免了假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。

5）高靈敏

■  此外為了減少樣本的抑制反應(yīng)，SAT對于樣本的制備采用磁珠吸附法，特異性捕獲靶標(biāo)確保了高特異性的提取，通過水相洗滌最大程度地去除各種雜質(zhì)，進(jìn)而避免了假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。SAT擴(kuò)增效率極高，30min即可獲得109倍的擴(kuò)增，再通過實時檢測，整個過程僅需要2.5h即可完成診斷，提高了檢測的靈敏度。同時SAT的特異性提取、特異性引物以及特異性探針保證了檢測結(jié)果的高特異性和準(zhǔn)確性。

6）無創(chuàng)檢測

■  該技術(shù)可以檢測包括尿液在內(nèi)的多種樣本，無需抽血穿刺，實現(xiàn)無創(chuàng)檢測。大量臨床數(shù)據(jù)表明，SAT技術(shù)檢測不同部位的樣本結(jié)果一致性很好。

7）輔助判愈

■  由于RNA只存在于活的細(xì)菌中，所以RNA檢測結(jié)果可以用于療效判斷，符合目前精準(zhǔn)醫(yī)療的要求。

作為一項成熟的檢測技術(shù)，SAT目前已成功地應(yīng)用于沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、解脲脲原體、生殖支原體、結(jié)核分枝桿菌、肺炎支原體、腸道病毒以及甲流病毒等多種臨床檢測。

上海肺科醫(yī)院Zhenling C等采用SAT技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌，其靈敏度可達(dá)100CFU/ml。廣州胸科醫(yī)院譚耀駒等收集疑似結(jié)核病患者的痰液734份、體液標(biāo)本94份(包括68份胸腔積液、21份腦脊液、5份關(guān)節(jié)積液，以下統(tǒng)稱“體液”)及病灶組織標(biāo)本76份，共計904份標(biāo)本。同時采用SAT法、改良羅氏培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，培養(yǎng)陽性者進(jìn)行基因芯片菌種鑒定。擴(kuò)大金標(biāo)準(zhǔn)（培養(yǎng) PCR法）作比對，SAT法在痰液、體液、病灶組織標(biāo)本的靈敏度和特異度分別為96.30％(260/270)、99.35％(461/464)；96.97％(32/33)、100.00％(61/61)；100.00％(27/27)、97.96％(48/49)。說明SAT具有極高的靈敏度和特異性。另外，Zhenling C等的研究結(jié)果顯示，通過SAT技術(shù)檢測，在涂陰患者標(biāo)本中的陽性率為39.2%，其結(jié)果與臨床診斷結(jié)果一致。上海復(fù)旦兒科醫(yī)院Jin X等人使用SAT-CA16試劑對CA16病原體進(jìn)行的檢測，SAT檢測CA16的靈敏度和特異性分別達(dá)到100%和99.2%。南方醫(yī)科大廣濟(jì)醫(yī)院高志華等人，以及浙江金華市中心醫(yī)院鄭雅萍等人采用SAT技術(shù)對同一患者的拭子和尿液標(biāo)本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果符合率高達(dá)100％，充分說明SAT檢測生殖道病原體可兼并尿液和拭子檢測。

這些研究均表明,SAT檢測技術(shù)準(zhǔn)確度非常高，并可采用多種樣本類型，可為臨床醫(yī)生提供有力的臨床診斷依據(jù)。

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