在western blot或者DNA電泳條帶中，經(jīng)常需要半定量統(tǒng)計(jì)條帶的灰度值，比較常用的是用ImageJ這個(gè)軟件來(lái)統(tǒng)計(jì)，但是如果不熟悉操作很容易得出錯(cuò)誤的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。本文從原理到操作告訴你如何用photoshop來(lái)統(tǒng)計(jì)灰度值

首先進(jìn)行實(shí)際操作之前我們先來(lái)理解下什么叫做灰度值

如上圖所示，灰度值就是從黑到白漸變過(guò)程中對(duì)應(yīng)的數(shù)值。0代表黑色，255代表白色。

上圖所示正常western blot條帶和反向之后的條帶。 上圖的箭頭分別指出了條帶以及背景對(duì)應(yīng)的區(qū)域。在正常條帶中條帶的值約為20，背景值為80；在反向圖片中，條帶的值 約為200，背景值為130。我們習(xí)慣了條帶越粗亮灰度值越大，因此我們一般是對(duì)其進(jìn)行反向之后測(cè)量。

在這里一定要去掉背景，至于為什么要去掉背景，在此不多說(shuō)了（視頻教程里將詳細(xì)介紹）請(qǐng)看下面圖片：

那么接下來(lái)開(kāi)始我們今天的教程：

1. 打開(kāi)圖片，因?yàn)閳D片有點(diǎn)傾斜，我們需要將其擺正，有兩種方法進(jìn)行拉直，第一種是將圖層旋轉(zhuǎn)(Ctrl+T，然后旋轉(zhuǎn)至其擺正)，另外一種是使用標(biāo)尺工具，在左邊快捷欄中安卓吸管工具不放，選擇標(biāo)識(shí)工具，然后在條帶上面從左邊點(diǎn)按住鼠標(biāo)不放一直拖動(dòng)到最右邊，最后點(diǎn)擊拉直圖層即可。

   
   
   
   

2. 點(diǎn)擊菜單欄的“窗口”，選擇直方圖，彈出下面面板