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伊紅,是我們常用的染料,英文名為Eosin,又叫四溴熒光素,是一種混合物。伊紅是生物學(xué)上常用的染料,一般觀察細(xì)胞用的HE染色,其中的E就是伊紅的簡(jiǎn)稱。
伊紅的分子式,但是實(shí)際試用的是混合物,而非純凈物,根據(jù)溶解度不同,分為水溶性和醇溶性的兩種,水溶性的并不是不溶于醇,而是溶解度較小的緣故。
加入濃鹽酸之后,原來的水溶液,竟然分成兩層了。
因?yàn)槌S?,所以科里面有許多以前購(gòu)買的伊紅試劑,反正我們上班之后一直用的就是那些試劑,技術(shù)員說,從來沒有購(gòu)買過。不過最近技術(shù)員說配置的伊紅不怎么著色,她用的方法大概是2.5-5g伊紅,溶于500毫升蒸餾水中配稱伊紅染液;后來我看了一下,還有其他的方法,就用另外一種方法:伊紅0.5克,蒸餾水75毫升,95%的酒精25毫升,以前用這種方法配的著色還行,不過這次用這種方法配,著色效果也不是很好。
大家找不到原因,最后擔(dān)心是不是試劑時(shí)間太長(zhǎng),過了失效期了?不過試劑瓶上并沒有有效期一說。就想到到病理技術(shù)網(wǎng)上問問,后來丁老師給了一個(gè)方法:2.5克溶于500毫升水當(dāng)中,然后加入10毫升濃鹽酸,靜置過夜然后過濾,之后把放置烤箱內(nèi)烤干,用這些干燥物,加95%的酒精1000毫升配稱原液,用時(shí)可以用1:1到1:2的比例稀釋。
其實(shí)這個(gè)方法以前看到過,只不過沒有看明白。最主要的疑惑就是不知道用水溶解之后過濾剩余的該如何處理?難道要把這些濾液倒掉嗎?所以一直有著用的一個(gè)疑問。這個(gè)疑問是因?yàn)槲覀冇玫氖撬苄缘囊良t,在水中的溶解度比較高,簡(jiǎn)單的方法直接就可以使用,這些濾液倒掉豈不可惜。
但是實(shí)際操作的時(shí)候,發(fā)現(xiàn)原來自己的擔(dān)心是多余的。
因?yàn)橐良t溶解添加濃鹽酸10毫升之后,原來的水溶液逐漸出現(xiàn)渾濁,最后慢慢地出現(xiàn)分層,上層的是淡黃色的清亮液體,而下面粉紅色的絮狀沉淀。原來是添加酸之后,水溶液里出現(xiàn)了絮狀沉淀。這樣伊紅是不會(huì)隨著過濾流掉的。看到這個(gè)現(xiàn)象才明白了這樣做的目的,這樣第二天過濾之后,原來的伊紅不僅沒有減少,似乎反而多了點(diǎn)。這樣做的目的是把原來的水溶性的伊紅變成了醇溶性的了。
之后按照操作,加入95%的酒精配成原液,我看了一下醇溶性伊紅的配制方法,2.5克也就可以配置成500毫升的伊紅溶液。當(dāng)天讓技術(shù)員試了試,著色非常好,稍不注意,伊紅染色就過了。
不過500毫升,是手工用的量,要是在染色機(jī)上,要1000毫升才行,可是這次因?yàn)槭窃囎?,所以沒有敢用太大的量??梢耘渲贸?000毫升的染液。想想丁老師的是用的飽和液,沒有介紹具體比例,而后來在百度百科里面給的比例是2.5克,可以配成1000毫升的染液。想想技術(shù)員之所以稍一染色,就出現(xiàn)染色過的原因,估計(jì)是染液濃度太大,看來下周稀釋一下,可以直接使用了。
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