實(shí)驗(yàn)萬事屋作品

我叫郭芙，是莫愁師姐的師妹，總之這件事情還挺棘手的。事情是這樣的，我投了一篇文章基因敲減方面的文章，做了NC 和siRNA的CCK8增殖實(shí)驗(yàn)，評(píng)審回來說增加一個(gè)add-back rescue實(shí)驗(yàn)。呃……天啊，啥是add-back rescue實(shí)驗(yàn)??？是不是要過表達(dá)這個(gè)基因??？師姐救命！

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是夜……

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莫愁：好感人啊，楚楚救了步驚云……

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小郭：師姐，現(xiàn)在要靠你救我的命了，你怎么還看這種十幾二十年前的電影啊，會(huì)暴露年齡的好么。說正經(jīng)的，師姐Rescue Experiment（回復(fù)實(shí)驗(yàn)）怎么做??！review要我補(bǔ)這個(gè)實(shí)驗(yàn)！

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莫愁：??？補(bǔ)回復(fù)實(shí)驗(yàn)??？呃……給你舉個(gè)例子吧……

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步驚云找雄霸搏命，最后被雄霸打斷手臂掉進(jìn)河里。然后被楚楚救了起來，楚楚她爹又把自己的麒麟臂移植給了步驚云。看到這里真的是讓人唏噓不已啊。好了，說正經(jīng)的，這其實(shí)就是一個(gè)Rescue Experiment。

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所謂的Rescue Experiment，就是在敲減實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了表型（被打斷手臂）之后，再通過過表達(dá)（移植上麒麟臂），回補(bǔ)表型（事實(shí)證明移植完麒麟臂之后，步驚云的表型確實(shí)回復(fù)了）的一種實(shí)驗(yàn)。

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但大家又不禁要問，老娘做的是慢病毒感染的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，再進(jìn)行過表達(dá)的話，會(huì)不會(huì)也被轉(zhuǎn)進(jìn)去的siRNA給敲減掉呢？這個(gè)問題就好像是在說，步驚云要是只移植上一條手臂那么單純，那到時(shí)候還不是被雄霸見一次打一次？

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好了，其實(shí)真正的Rescue Experiment，是要對(duì)你過表達(dá)的這個(gè)目的基因的序列進(jìn)行突變的。也就是利用所謂的Off-target effects（脫靶效應(yīng)）來處理過表達(dá)的序列。siRNA僅僅是目的基因的十幾個(gè)堿基起到作用，也就是可以互補(bǔ)結(jié)合上去，所以只要Rescue Experiment中過表達(dá)的這個(gè)目的基因，在靶點(diǎn)位置，做一定的突變，就可以使siRNA對(duì)其脫靶了。就好像步驚云移植上去的不是他自己的那條斷臂，而是楚楚老爹帶了紋身的麒麟臂一樣。

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問題又來了，既然過表達(dá)的基因要突變，那表達(dá)出來的蛋白還是原來的基因的么？這個(gè)問題很簡(jiǎn)單，因?yàn)榛虻拿艽a子是有簡(jiǎn)并性的，也就是說三聯(lián)體密碼的第二和第三個(gè)堿基是可以調(diào)換的，同樣表達(dá)相同的蛋白。這樣就不會(huì)影響到原有的敲減實(shí)驗(yàn)了。好了，明白了么！

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小郭：師姐，我懂了！楚楚的老爹好可憐啊……賠了女兒又?jǐn)啾邸?/p>

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莫愁：……這不是重點(diǎn)……

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…華麗麗的分割線…

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李莫愁博士：紋了身就不認(rèn)識(shí)你了么，確實(shí)對(duì)于siRNA來說，紋了身的mRNA就基本上不認(rèn)識(shí)他了。

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