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1、材料與方法

1.1 對發(fā)病豬進(jìn)行剖檢

主要的病變發(fā)生在肺部，肺臟心葉發(fā)生對稱性肉樣變，肺臟水腫、充血、淤血，肺臟彌散性間質(zhì)性肺炎的癥狀均有不同程度出現(xiàn)，喉頭未見異常，懷疑存在支原體的繼發(fā)感染（圖1）。全身淋巴結(jié)腫大、出血（圖2）。腎呈土黃色，表面凹凸不平（圖3）。脾臟邊緣發(fā)黑、梗死、不整（圖4）。腦充血、胃底充血，其他臟器未見異常。

1.2 病料采集及豬場免疫情況

采取送檢新鮮死亡的仔豬的扁桃體、肺臟、腦組織和淋巴結(jié)。該豬場進(jìn)行過豬瘟免疫（21 d），豬偽狂犬病免疫（3 d，28d）。

1.3 酶和其他試劑

Taq DNA 聚合酶、dNTPs、DEPC水、DL2 000 Marker、總DNA 抽提試劑盒均購自上海生工生物有限公司，豬瘟RT-PCR 診斷試劑盒，豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR 診斷試劑盒、豬偽狂犬病PCR 診斷試劑盒購自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。豬瘟抗體檢測試劑盒、豬藍(lán)耳病檢測試劑盒、豬偽狂犬病gB 抗體檢測試劑盒購自美國IDEXX 生物試劑公司。

1.4 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank發(fā)表的PCV2 用Oligo6.0 軟件設(shè)計(jì)引物。

1.5 病毒核酸檢測

豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病病毒的擴(kuò)增分別用豬瘟RT-PCR診斷試劑盒、豬藍(lán)耳病RT-PCR 診斷試劑盒、豬偽狂犬病毒PCR 診斷試劑盒進(jìn)行，PCR 產(chǎn)物經(jīng)1.2％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。豬2 型圓環(huán)病毒擴(kuò)增應(yīng)用總DNA 抽提試劑盒提取模板，體外擴(kuò)增反應(yīng)條件95 ℃ 2 min ；（94 ℃ 30 s，50 ℃ 40 s，72 ℃ 40 min）×35 個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min，PCR 產(chǎn)物經(jīng)1.2％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.6 豬ELISA 抗體檢測結(jié)果

將送檢3 份血樣離心分離血清，將稀釋后的血清加入檢測板，進(jìn)行 ELISA實(shí)驗(yàn)，將檢測板放入酶標(biāo)儀內(nèi)測各孔的OD 值。

2、試驗(yàn)結(jié)果

2.1 RT-PCR 擴(kuò)增后結(jié)果

豬瘟檢測結(jié)果進(jìn)行RT-PCR 擴(kuò)增后，PCR 產(chǎn)物用1.2％瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察，可見到232 bp 左右的基因條帶，大小與CSFV預(yù)期基因相符。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測結(jié)果進(jìn)行RT-PCR 擴(kuò)增后，PCR 產(chǎn)物用1.2％瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳后在凝膠成像系統(tǒng)中觀察，可見到432 bp 左右的基因條帶，大小與PRRSV 預(yù)期基因相符（見圖5）。

2.2 豬偽狂犬病病毒、豬2 型圓環(huán)病毒

豬偽狂犬病病毒、豬2 型圓環(huán)病毒檢測結(jié)果，將PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物用1.2％瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳，結(jié)果未見到目的基因。

2.3 抗體檢測結(jié)果

將送檢3 份血樣離心分離血清，將稀釋后的血清加入檢測板，進(jìn)行 ELISA實(shí)驗(yàn)，將檢測板放入酶標(biāo)儀內(nèi)測各孔的OD 值，結(jié)果見表1。

3、結(jié)果分析及防控建議

3.1 豬瘟結(jié)果分析

該豬場哺乳仔豬豬瘟病原檢測為強(qiáng)陽性，血清學(xué)檢測結(jié)果顯示，送檢豬只豬瘟的抗體是合格的，說明哺乳仔豬發(fā)病主要是以窩為單位，發(fā)病的主要原因是母豬免疫不好或帶毒造成的，建議對初生仔豬進(jìn)行超免，對母豬群進(jìn)行抗體檢測，對不合格母豬進(jìn)行豬瘟疫苗的補(bǔ)免，之后再進(jìn)行檢測，將抗體值是陰性的母豬淘汰。

3.2 豬藍(lán)耳病結(jié)果分析

哺乳仔豬和保育豬藍(lán)耳病抗原均為陽性，說明豬群正存在藍(lán)耳病的暴發(fā)流行，是豬大批死亡的原因所在。從藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果分析，S/P 值在未免疫疫苗的情況下還是比較高的。建議措施：

1）對發(fā)病豬立即隔離。發(fā)病較重的仔豬進(jìn)行淘汰，病死豬深埋。對豬舍和用具進(jìn)行徹底消毒。

2）控制發(fā)病豬群的繼發(fā)性細(xì)菌感染，即做好藥物保健和預(yù)防，應(yīng)用藥物替米考星、支原凈等對母豬進(jìn)行凈化。發(fā)病仔豬治療以補(bǔ)充電解質(zhì)和對癥用藥為主，控制繼發(fā)感染。使用減毒活疫苗，對初生仔豬和母豬進(jìn)行免疫。

3）進(jìn)行疫苗免疫，建議使用弱毒苗，對空懷期母豬進(jìn)行免疫，對新生仔豬7 d 免疫。

4、討論

該場是我國北方中小型養(yǎng)豬場和散戶的典型代表，這些豬場往往在管理上和疫病防控上存在諸多的漏洞，沒有科學(xué)的管理和免疫程序，發(fā)生傳染病往往沒有科學(xué)的實(shí)驗(yàn)室診斷而延誤病情，這些豬場診斷疾病主要是依靠基層有經(jīng)驗(yàn)的獸醫(yī)剖檢進(jìn)行診斷，但現(xiàn)在的疾病從眼觀上病變都不是十分的明顯、典型，而且混合感染、繼發(fā)感染都比較嚴(yán)重，臨床發(fā)病越來越嚴(yán)重，藥物濫用而不見效果。有時(shí)豬場老板對獸醫(yī)人員的疾病診斷產(chǎn)生質(zhì)疑和不信任感，使得治療執(zhí)行力下降，延誤最佳治療時(shí)機(jī)。中小型養(yǎng)豬場和散戶中豬病的流行和泛濫是以上諸多原因造成的。

該場仔豬的死亡主要是藍(lán)耳病暴發(fā)的結(jié)果，就目前我國豬藍(lán)耳病的發(fā)病情況來看，無論什么季節(jié)都會(huì)有豬藍(lán)耳病發(fā)病的案例，但是發(fā)病最密集的季節(jié)為夏秋季，一般情況下豬藍(lán)耳病發(fā)病時(shí)會(huì)呈現(xiàn)成片感染趨勢，受感染豬群的發(fā)病率以及死亡率都非常高。對于藍(lán)耳病的防控應(yīng)做到掌握和了解本場感染和流行狀況，主要應(yīng)用血清學(xué)抗體檢測技術(shù)。對于藍(lán)耳病陰性豬場，不使用疫苗是最佳的手段，此外，應(yīng)該做好生物安全措施，豬場進(jìn)行閉群飼養(yǎng)，盡量避免引種，如確實(shí)需要引種，必須檢測和檢疫，絕對不能引入陽性豬。還需定期對豬場進(jìn)行監(jiān)測，保持藍(lán)耳病陰性狀態(tài)。對藍(lán)耳病穩(wěn)定而不活躍的豬場（母豬群陽性，但繁殖性能不受影響；生長豬群無感染），應(yīng)做到以下幾點(diǎn)：應(yīng)盡量不用減毒活疫苗免疫，此外還應(yīng)加強(qiáng)母豬的飼養(yǎng)管理，定期監(jiān)測其感染狀況；強(qiáng)化豬場的消毒與衛(wèi)生，防止母豬排毒在豬場內(nèi)傳播；后備陰性母豬配種前與經(jīng)產(chǎn)母豬混群飼養(yǎng)；監(jiān)測生產(chǎn)豬群的血清學(xué)。對藍(lán)耳病穩(wěn)定而活躍的豬場（母豬群陽性，但繁殖性能不受影響；生長豬群有感染，臨床發(fā)病，因繼發(fā)感染有一定死亡率；病毒在豬場內(nèi)傳播），應(yīng)強(qiáng)化豬場的消毒衛(wèi)生，降低或杜絕病毒在豬場內(nèi)傳播；適當(dāng)使用減毒活疫苗，依據(jù)實(shí)驗(yàn)室確診的生長豬群的感染和發(fā)病階段，提前3 ～ 4 周為生產(chǎn)豬群進(jìn)行一次免疫，豬群穩(wěn)定后應(yīng)立即停止使用活疫苗；控制感染豬群的繼發(fā)性細(xì)菌感染，即做好藥物保健和預(yù)防。（資料來源：李樹東 豬業(yè)科學(xué),2015(9)P70-71）