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克隆植物技術(shù)

 老刻刀 2014-05-30

克隆植物技術(shù)

(2012-06-05 11:17:56)

克隆并不神秘,從一棵柳樹上剪下一段段樹枝,進(jìn)行扦插,形成許多遺傳性狀相同的植株,這就是克隆,是器官水平上的克隆植物克隆技術(shù)流程

  植物克隆技術(shù)技術(shù)是是利用離體培養(yǎng)技術(shù)在試管內(nèi)大量繁殖植物種苗的方法。它是將植株上的細(xì)胞或小塊組織(比如一塊葉片、一段莖節(jié)、一個芽、一個花蕾中一?;ǚ鄣龋┰谂囵B(yǎng)瓶中培養(yǎng),在短短幾個月時間內(nèi)便能繁殖出成千上萬個新的植株。植物克隆技術(shù)優(yōu)勢主要是快速、周年生產(chǎn)、變異小、無需種子繁殖等等。

  植物克隆工廠是指利用環(huán)境控制和自動化高新技術(shù)進(jìn)行植物全年生產(chǎn)的體系,包括無土栽培、植物克隆等技術(shù)以及植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的工業(yè)化產(chǎn)體系。1957年世界上第一工廠誕生在丹麥到1998年,日本有用于研究、展示、生產(chǎn)的植物工廠近四十個,其中生產(chǎn)用植物工廠17個。植物工廠建造雖未達(dá)到應(yīng)用普及發(fā)展的時期,但其出現(xiàn)預(yù)示著將來的發(fā)展前景。

  植物克隆工廠,其生產(chǎn)采用全封閉的方式,嚴(yán)格實(shí)行全面和有效的控制環(huán)境及先進(jìn)的植物工程技術(shù),使生產(chǎn)到采收的全過程連續(xù)進(jìn)行并高度自動化、流水化作業(yè),實(shí)現(xiàn)全年連續(xù)的生產(chǎn),完全擺脫了自然條件的限制。

植物克隆技術(shù)基本過程

培養(yǎng)基的制備

  1、 母液的配制和保存

  為減少工作量一般將各種成分配成比所需濃度高10-100倍的母液,用時按比例稀釋。在配制大量元素?zé)o機(jī)鹽母液時,要防止在混合各種鹽類時產(chǎn)生沉淀,為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合,同時在混合時要注意先后順序,把鈣離子、錳離子、鋇離子和硫酸根、磷酸根錯開,以免發(fā)生作用,相互結(jié)合生成沉淀。另外在混合各種無機(jī)鹽時,稀釋度要大,慢慢混合,同時邊混合邊攪拌。

  配制好的母液分別貼好標(biāo)簽,注明母液號、配制倍數(shù)、日期及配制1L培養(yǎng)基時應(yīng)取的量。母液儲存于2-4℃的冰箱中。

  2、 培養(yǎng)基的配制

  (1) 稱取規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖,加入一定量的蒸餾水,加熱使其溶解。

 ?。?) 在燒杯中加入規(guī)定量的各種母液,包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的特殊補(bǔ)加物。

 ?。?) 將母液混合物加入融化的瓊脂中,再加入糖類物質(zhì),定容至所需體積,攪勻。

  (4) 用1mol/L的氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)pH值。

  (5) 趁熱將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中。

  (6) 用棉塞或封口膜蓋住瓶口。

 ?。?) 在121-126℃滅菌15-20min。

 ?。?) 滅菌后,待壓力歸零后將培養(yǎng)基取出讓其凝固。

材料的消毒與接種

  1、 材料的選擇和確定

  不同種類的植物以及同種植物不同的器官對誘導(dǎo)條件的反應(yīng)是不一致的,因此,在取材時要充分考慮季節(jié)的影響、器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡、取材的部位以及材料的大小。

  2、 材料的消毒

  一般材料先用自來水沖洗,再用70%的酒精浸泡數(shù)秒,倒去酒精,再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min,后用無菌水沖洗3-5次。

  3、 接種

  將材料切成所需的形狀和大小,接入培養(yǎng)基中。

初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根與移栽

  1、 初代培養(yǎng)

  在初代培養(yǎng)基上,外植體經(jīng)不同的途徑可以誘導(dǎo)出愈傷組織、直接分化出芽或誘導(dǎo)出胚狀體。

  2、 繼代培養(yǎng)

  將初代培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上,使愈傷組織分化出叢生芽、不定芽繼續(xù)增殖、胚狀體發(fā)育成完整植株。

  3、 生根

  將健壯的試管苗插入生根培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)根的形成。

  4、 試管苗的移栽

  打開瓶蓋,逐漸降低濕度,并逐漸增強(qiáng)光照,進(jìn)行馴化,以適應(yīng)環(huán)境,經(jīng)過一段時間的煉苗即可移入盆中。

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