MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)

1．取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細(xì)胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時(shí)讓細(xì)胞帖壁（如果是懸浮細(xì)胞可直接進(jìn)行下一步）

2．用RPMI-1640培養(yǎng)液2～10倍遞次稀釋細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣品，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對(duì)照孔6個(gè)：3個(gè)陽性對(duì)照孔，每孔加0.1ml含大劑量細(xì)胞因子的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培養(yǎng)液。在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48小時(shí)或預(yù)定的時(shí)間。

3．吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細(xì)胞，應(yīng)在吸去上清液前離心培養(yǎng)板）。

4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6小時(shí)。

5．每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇，在振蕩器上振蕩混勻，讓還原產(chǎn)物充分溶解。置酶聯(lián)檢測(cè)儀上測(cè)定光密度（OD）值，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm。以O(shè)D值對(duì)樣品稀釋度作圖，比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣品曲線即可求得待測(cè)樣品中細(xì)胞因子的含量。